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1、目的:口腔鱗狀細(xì)胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤,治療以手術(shù)、放療和化療為主,但生存率仍無(wú)明顯提高。研究發(fā)現(xiàn)人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染與口腔癌發(fā)生有關(guān)。HPVE6和E7癌蛋白在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)為免疫治療提供了良好的靶抗原。研發(fā)HPVE6/E7融合蛋白疫苗為治療HPV相關(guān)口腔鱗癌提供了新的方法。課題組通過(guò)轉(zhuǎn)染HPV16E6/E
2、7基因至口腔黏膜正常上皮細(xì)胞,再經(jīng)致癌劑誘導(dǎo)至體外口腔鱗癌模型。本研究旨在該模型基礎(chǔ)上,探討融合蛋白疫苗治療實(shí)驗(yàn)性口腔鱗癌的療效,并研究其可能機(jī)制。 方法:首先通過(guò)多次裸鼠移植和原代培養(yǎng)的方法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)性口腔鱗癌細(xì)胞模型。運(yùn)用細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫熒光、生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞周期檢測(cè)和裸鼠體內(nèi)成瘤等方法檢測(cè)第二代HB(HIOEC-BaP)細(xì)胞的生物學(xué)特性。其次通過(guò)腹腔注射人淋巴細(xì)胞和皮下接種HB-2細(xì)胞建立重建人免疫功能荷瘤NOD/SCID鼠模
3、型,應(yīng)用組織學(xué)、流式細(xì)胞儀和ELISA等方法檢測(cè)人免疫功能在NOD/SCID鼠體內(nèi)的重建情況和腫瘤差異。最后,在以上細(xì)胞模型和免疫重建模型基礎(chǔ)上,通過(guò)腫瘤生長(zhǎng)曲線、流式細(xì)胞學(xué)、免疫組化、細(xì)胞毒細(xì)胞殺傷(cytotoxic T lymphocyte,CTL)觀察疫苗治療效果和機(jī)制。 結(jié)果:從HB96細(xì)胞篩選到高成瘤性HB-2細(xì)胞。HB-2形態(tài)上表現(xiàn)為核漿比例增大,可見多核巨細(xì)胞,核分裂相多見,體外增殖快于HB96,裸鼠體內(nèi)成瘤率和
4、腫瘤體積均高于HB96。重建了人免疫功能的NOD/SCID鼠模型,人化荷瘤組脾重和外周血人CD3+、CD3+CD8+淋巴細(xì)胞均高于單純荷瘤組。免疫組化顯示脾臟內(nèi)可見人淋巴細(xì)胞抗原表達(dá)陽(yáng)性。但兩組腫瘤體積和瘤重?zé)o明顯差異。融合蛋白疫苗治療免疫重建荷瘤NOD/SCID鼠模型顯示,腫瘤體積在接種腫瘤后第27天疫苗組較無(wú)疫苗組明顯縮小,外周血和脾臟中均檢測(cè)到人淋巴細(xì)胞的存在。不同效靶比時(shí),CTL殺傷效率疫苗組均高于無(wú)疫苗組,效靶比為20:1,殺
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