高糖低氧條件對HIF-1a轉(zhuǎn)錄活性影響的機制及藥物干預(yù)實驗研究.pdf

1、[目的]明確糖濃度對低氧條件下缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)表達和轉(zhuǎn)錄活性的影響，探討其中可能的機制以及中藥麝香保心丸干預(yù)對此的影響。
　　[方法]將體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)分為四組：常氧(21％O2)常糖(5.5mM)組，常氧高糖組(25mM)，低氧(1％O2)常糖組和低氧高糖組，在高糖濃度作用48h和低氧作用6h后分別用realtimePCR檢測HIF-1α和VEGF基因表達，WesternBlot檢測HIF

2、-1α蛋白表達，免疫共沉淀檢測HIF-1α泛素化降解程度，HIF-1α的轉(zhuǎn)錄活性和去鐵胺對其轉(zhuǎn)錄活性的影響采用熒光素酶報告基因檢測；進一步觀察在正常氧濃度和低氧的情況下，不同糖濃度(5.5mM、15mM、20mM、25mM、45mM)對HIF-1α抑制因子(FIH)基因表達、蛋白表達的影響，采用化學(xué)衍生反應(yīng)產(chǎn)生熒光的方法檢測高糖低氧條件對FIH酶活性的影響，細(xì)胞免疫熒光檢測FIH細(xì)胞內(nèi)的定位。在麝香保心丸干預(yù)研究中，分別采用CCK8、T

3、ranswell和劃痕實驗以及流式細(xì)胞儀檢測不同濃度的麝香保心丸對HUVEC的增殖、遷移以及凋亡的影響，并觀察麝香保心丸干預(yù)對HIF-1α和FIH表達的影響。
　　[結(jié)果]與正常氧濃度組相比(5.5mM和25mM)，低氧條件下HIF-1α蛋白表達顯著增加，其泛素化降解程度顯著下降，其轉(zhuǎn)錄活性顯著增強(P值均<0.05)，然而，無論是在正常氧濃度的情況下還是在低氧條件下，糖濃度的變化對HIF-1α基因表達和蛋白表達均無顯著影響，高糖

4、主要抑制低氧誘導(dǎo)的HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性(P<0.05)，運用去鐵胺干預(yù)可逆轉(zhuǎn)高糖對低氧誘導(dǎo)的HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用；與正常氧濃度組比較，低氧條件下FIH基因表達和蛋白表達均下降(P<0.05)，而在低氧條件下，20mM和25mM糖濃度組FIH基因和蛋白表達顯著高于5.5mM糖濃度組(P<0.05)，25mM糖濃度組FIH酶活性顯著高于5.5mM糖濃度組(P<0.05)。麝香保心丸濃度在0.1μg/ml時可促進HUVEC增殖，0.

5、1μg/ml和1μg/ml時促進HUVEC遷移，1μg/ml時抑制HUVEC凋亡，5μg/ml及以上濃度時可抑制HUVEC增殖和遷移，促進細(xì)胞的凋亡。麝香保心丸對HIF-1α蛋白表達無顯著影響，而不同濃度的麝香保心丸均可抑制FIH基因和蛋白的表達，以2μg/ml濃度抑制作用最強(P<0.05)。
　　[結(jié)論]高糖可抑制低氧誘導(dǎo)的HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性，而這種抑制作用可能與其增加低氧條件下FIH的表達和促進其酶活性有關(guān)。低濃度麝香保心