TLR3及HPV16E6變異在宮頸病變中的作用研究.pdf

1、目的:
　　探討TLR3、HPV病毒負(fù)荷量在宮頸病變進(jìn)展過程中的作用；探討TLR3與HPV感染調(diào)節(jié)的關(guān)系；了解本院檢測的HPV16E6基因突變在宮頸病變中的分布特征，探討HPV16E6基因突變與宮頸病變進(jìn)展的關(guān)系。
　　方法:
　　從54例HPV16陽性患者宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本中提取DNA作為模版，設(shè)計對應(yīng)的引物，用PCR方法擴(kuò)增TLR3和HPV16E6片段，對TLR3和HPV16E6進(jìn)行半定量檢測，HPV16E6的PCR

2、產(chǎn)物被純化回收后送測序。測序結(jié)果和GenBank中的德國標(biāo)準(zhǔn)株比對，分析基因變異情況。
　　結(jié)果:
　　1.根據(jù)宮頸病變程度分為三組，其中A組(包括慢性宮頸炎14例、CINⅠ4例)18例、B組(包括CINⅡ-Ⅲ12例及宮頸原位癌6例)18例及C組(包括宮頸浸潤癌)18例，3組患者年齡之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(p=0.506)。
　　2.各組TLR3的表達(dá)：在A組、B組、C組中，TLR3DNA表達(dá)量分別為(0.6676±0

3、.0226)、(0.6484±0.0353)和(0.5652±0.0330)，其表達(dá)量逐漸減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001)；其在A組及B組中的表達(dá)明顯高于C組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001；p<0.001)；在A組中的表達(dá)略高于B組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.066)。
　　3.各組HPV16E6DNA表達(dá)情況：在A組、B組及C組中，HPV16E6DNA的含量分別為(0.3771±0.0266)、(0.6600±0

4、.0401)和(0.7393±0.0271)，其含量逐漸增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001)；其在B組及C組中表達(dá)均高于A組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001；p<0.001)；在C組中表達(dá)高于B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001)。
　　4.在測序成功的53例樣本中發(fā)現(xiàn)HPV16E6DNA在26例樣本中(49.06％)存在4個位點(diǎn)突變，其余27例樣本(50.94％)未發(fā)現(xiàn)突變，為E6野生型。在3組標(biāo)本中，熱突變點(diǎn)為T17

5、8G(D25E)，這種變體與HPV16亞洲型As相同，此點(diǎn)突變在A組中的分布低于在B組和C組中的分布，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05；p<0.025)，而在B組和C組中的分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.25)。有2例宮頸癌標(biāo)本發(fā)生T241G(3.77％)。另有2個單例標(biāo)本點(diǎn)突變是G188T(L30I，1.89％)和G543A(L147F，1.89％)。
　　5.3組宮頸病變中TLR3表達(dá)水平與HPV16負(fù)荷量呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r

6、=-0.637，p<0.001。
　　結(jié)論：
　　1.TLR3可能在HPV感染的調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用，其可能是機(jī)體應(yīng)答HPV感染的主要免疫機(jī)制；TLR3在宮頸病變中表達(dá)的異?？赡芘c宮頸細(xì)胞由宮頸癌前病變向?qū)m頸癌的進(jìn)展過程密切相關(guān)。
　　2.HPV16負(fù)荷量與宮頸病變的進(jìn)展密切相關(guān)，HPV16E6基因突變可能是輕度宮頸病變向重度宮頸病變進(jìn)展過程中的重要危險因素。
　　3.TLR3可能在HPV16E6表達(dá)的調(diào)節(jié)過程