TLR3及HPV16E6變異在宮頸病變中的作用研究.pdf

1、目的:
　　探討TLR3、HPV病毒負荷量在宮頸病變進展過程中的作用；探討TLR3與HPV感染調(diào)節(jié)的關系；了解本院檢測的HPV16E6基因突變在宮頸病變中的分布特征，探討HPV16E6基因突變與宮頸病變進展的關系。
　　方法:
　　從54例HPV16陽性患者宮頸脫落細胞標本中提取DNA作為模版，設計對應的引物，用PCR方法擴增TLR3和HPV16E6片段，對TLR3和HPV16E6進行半定量檢測，HPV16E6的PCR

2、產(chǎn)物被純化回收后送測序。測序結果和GenBank中的德國標準株比對，分析基因變異情況。
　　結果:
　　1.根據(jù)宮頸病變程度分為三組，其中A組(包括慢性宮頸炎14例、CINⅠ4例)18例、B組(包括CINⅡ-Ⅲ12例及宮頸原位癌6例)18例及C組(包括宮頸浸潤癌)18例，3組患者年齡之間差異無統(tǒng)計學意義。(p=0.506)。
　　2.各組TLR3的表達：在A組、B組、C組中，TLR3DNA表達量分別為(0.6676±0

3、.0226)、(0.6484±0.0353)和(0.5652±0.0330)，其表達量逐漸減低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.001)；其在A組及B組中的表達明顯高于C組，差異均具有統(tǒng)計學意義(p<0.001；p<0.001)；在A組中的表達略高于B組，差異無統(tǒng)計學意義(p=0.066)。
　　3.各組HPV16E6DNA表達情況：在A組、B組及C組中，HPV16E6DNA的含量分別為(0.3771±0.0266)、(0.6600±0

4、.0401)和(0.7393±0.0271)，其含量逐漸增加，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.001)；其在B組及C組中表達均高于A組，差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.001；p<0.001)；在C組中表達高于B組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.001)。
　　4.在測序成功的53例樣本中發(fā)現(xiàn)HPV16E6DNA在26例樣本中(49.06％)存在4個位點突變，其余27例樣本(50.94％)未發(fā)現(xiàn)突變，為E6野生型。在3組標本中，熱突變點為T17

5、8G(D25E)，這種變體與HPV16亞洲型As相同，此點突變在A組中的分布低于在B組和C組中的分布，差異均具有統(tǒng)計學意義(p<0.05；p<0.025)，而在B組和C組中的分布差異無統(tǒng)計學意義(p>0.25)。有2例宮頸癌標本發(fā)生T241G(3.77％)。另有2個單例標本點突變是G188T(L30I，1.89％)和G543A(L147F，1.89％)。
　　5.3組宮頸病變中TLR3表達水平與HPV16負荷量呈負相關，相關系數(shù)r

6、=-0.637，p<0.001。
　　結論：
　　1.TLR3可能在HPV感染的調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用，其可能是機體應答HPV感染的主要免疫機制；TLR3在宮頸病變中表達的異常可能與宮頸細胞由宮頸癌前病變向?qū)m頸癌的進展過程密切相關。
　　2.HPV16負荷量與宮頸病變的進展密切相關，HPV16E6基因突變可能是輕度宮頸病變向重度宮頸病變進展過程中的重要危險因素。
　　3.TLR3可能在HPV16E6表達的調(diào)節(jié)過程