版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、背景:
高危型人乳頭瘤病毒(high risk-human papillomaviruses,HR-HPVs)感染在宮頸癌發(fā)生中具有重要作用,其早期基因E7的持續(xù)表達是其致癌的關(guān)鍵,E7蛋白可通過多種途徑誘導(dǎo)細胞異常增殖。抑癌基因RNA結(jié)合基序單鏈相互作用蛋白3(RNA binding motif, single-stranded-interacting protein3,RBMS3)在正常組織廣泛表達,而在癌細胞系和原發(fā)性腫
2、瘤中表達顯著降低。本課題組經(jīng)Agilent人基因表達譜芯片分析,發(fā)現(xiàn)沉默E7表達后,RBMS3表達上調(diào)。
目的:
以HPV16 E7表達陽性的宮頸鱗癌組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelialneoplasia,CIN)組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細胞株(宮頸癌SiHa細胞)以及HPV16 E7表達陰性的宮頸鱗癌組織、CIN組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細胞株(宮頸癌C33-A細胞)為研
3、究對象,探討HPV16相關(guān)宮頸癌發(fā)生中RBMS3的表達及作用,以期為進一步研究HPV16相關(guān)宮頸癌防治方法提供科學(xué)依據(jù)。
方法:
1.通過Western blotting方法檢測RBMS3在HPV16 E7表達陽性的宮頸癌SiHa細胞和HPV16 E7表達陰性的宮頸癌C33-A細胞中的表達。
2.通過免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)染色方法檢測RBMS3在HPV16E7表達陽
4、性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織和HPV16 E7表達陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達,并分析二者表達的關(guān)系。
3.常規(guī)培養(yǎng)宮頸癌C33-A細胞,提取細胞總RNA并定量,通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法擴增RBMS3基因編碼序列(coding sequence,CDS),構(gòu)建真核表達
5、重組質(zhì)粒peDNA3.1-RBMS3并鑒定,經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)將pcDNA3.1-RBMS3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HPV16 E7表達陽性的宮頸癌SiHa細胞,通過生長曲線、克隆形成率、AnnexinⅤ-FITC/PI結(jié)合流式細胞術(shù)等方法觀察穩(wěn)定表達RBMS3對SiHa細胞增殖和凋亡的影響。
結(jié)果:
1.Western blotting結(jié)果顯示:①HPV16 E7在宮頸癌C33-A細胞中不表達,而HPV16 E7在宮頸癌SiHa細胞
6、中表達。②C33-A細胞中RBMS3的表達顯著高于SiHa細胞(P<0.01)。
2.IHC結(jié)果顯示:RBMS3在HPV16 E7表達陽性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達均分別顯著低于其在HPV16 E7表達陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織癌組織中的表達,二者表達呈負相關(guān)(P<0.01)。
3.①細胞生長曲線和倍增時間計算結(jié)果顯示:SiHa-RBMS3細胞的生長速度較SiHa-ve
7、ct細胞的生長速度顯著減慢(P<0.01),倍增時間顯著延長(P<0.01)。②平板克隆形成實驗結(jié)果顯示:SiHa-RBMS3細胞的克隆形成均數(shù)顯著低于SiHa-vect細胞的克隆形成均數(shù)(P<0.01),克隆體積也較小。③AnnexinⅤ-FITC/PI結(jié)合流式細胞術(shù)結(jié)果顯示:SiHa-RBMS3細胞凋亡均數(shù)明顯高于SiHa-vectt細胞(P<0.01),SiHa-RBMS3細胞和SiHa-vect細胞凋亡細胞百分比分別為:11.5
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- ZNF84在HPV16相關(guān)宮頸鱗癌發(fā)生與演進中的作用.pdf
- MUC16在HPV16相關(guān)宮頸癌發(fā)生與演進中的作用.pdf
- DRR1在HPV16相關(guān)宮頸癌發(fā)生與演進中的作用.pdf
- MicroRNA-138與microRNA-720在HPV16相關(guān)宮頸鱗癌組織中表達差異的研究.pdf
- MicroRNA在HPV16(+)宮頸鱗癌組織中的異常表達及其臨床意義.pdf
- 宮頸癌組織HPV16早期基因E6-E7相關(guān)轉(zhuǎn)錄本以及整合基因的分析.pdf
- 沉默HPV16 E6-E7基因?qū)m頸鱗癌EMT和Wnt通路的作用.pdf
- HPV16型L1蛋白在宮頸脫落細胞和宮頸病變中的表達.pdf
- PcG蛋白HPC2在HPV16感染的宮頸癌細胞中調(diào)控作用初探.pdf
- 宮頸鱗癌組織中HPV16 E6與人端粒保護蛋白1的檢測及關(guān)系的研究.pdf
- Daxx和HPV16 E6在宮頸病變中的表達及其意義.pdf
- 宮頸細胞HPV16病毒DNA甲基化與宮頸病變相關(guān)性研究.pdf
- 哈薩克族食管鱗癌中HPV16與MMP-9等基因的相關(guān)性研究.pdf
- miR-21在HPV16感染的宮頸鱗狀上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中作用的研究.pdf
- HPV16整合至宿主基因組導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生發(fā)展的機理研究.pdf
- 諾帝對HPV16亞基因永生化人宮頸上皮細胞的作用.pdf
- Daxx-C抗體的制備及其在HPV16陽性宮頸癌細胞中的初步應(yīng)用.pdf
- TLR3及HPV16E6變異在宮頸病變中的作用研究.pdf
- LIGHT(TNFSF14)作為HPV16 E7 DNA疫苗佐劑在宮頸癌治療中的作用研究.pdf
- TG2及HPV16-E6蛋白在宮頸鱗癌中的表達研究.pdf
評論
0/150
提交評論