氧化還原狀態(tài)改變對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：通過(guò)改變細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)含量驗(yàn)證胃腺癌細(xì)胞株 SGC7901和SGC7901/DDP對(duì)抗腫瘤藥物氟尿嘧啶(5-FU)和絲裂霉素(MMC)的敏感性變化并分析其相互的關(guān)系,并且探討多藥耐藥的初步機(jī)制,為解決胃癌多藥耐藥提供有價(jià)值的基礎(chǔ)研究。
　　方法：(1)利用噻唑藍(lán)比色法(MTT法)測(cè)定SGC7901和SGC7901/DDP細(xì)胞株對(duì)順鉑(CDDP)、5-FU和MMC半數(shù)抑制濃度(IC50)值,分析兩細(xì)胞株對(duì)抗腫瘤

2、藥物敏感性的差異,并計(jì)分別計(jì)算其耐藥倍數(shù)。(2)無(wú)毒BSO濃度的測(cè)定及BSO預(yù)處理后SGC7901細(xì)胞及SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)5-FU和MMC的IC50值,并對(duì)其差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(3)測(cè)定NAC處理后 SGC7901細(xì)胞及SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)5-FU和MMC的IC50值,并對(duì)其差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(4)測(cè)定NAC對(duì)BSO預(yù)處理SGC7901細(xì)胞及SGC7901/DDP對(duì)5-FU和MMC的IC50值,并對(duì)其差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)

3、分析。(5)觀測(cè)不同濃度 BSO或者NAC處理后, SGC7901細(xì)胞及SGC7901/DDP內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)變化及利用 RT-PCR法檢測(cè)Mrp1的表達(dá)情況,用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析相互之間差異。
　　結(jié)果：(1)SGC7901/DDP細(xì)胞株對(duì) CDDP、5-FU及 MMC IC50值明顯高于SGC7901,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),其耐藥倍數(shù)分別為6.20,3.49,1.97倍。(2)與對(duì)照組相比,BSO預(yù)處理后可以

4、明顯降低SGC7901/DDP細(xì)胞和SGC7901細(xì)胞對(duì)5-FU的IC50值,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);同時(shí) BSO處理后,SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)MMC的IC50值也明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05);但是在觀測(cè)SGC7901細(xì)胞對(duì)MMC IC50值有輕微的減少趨勢(shì),但是與對(duì)照組相比,兩者之間沒(méi)有顯著的差異(p>0.05)。(3)與對(duì)照組相比,NAC預(yù)處理后SGC7901/DDP細(xì)胞和SGC7901細(xì)胞對(duì)MMC的

5、IC50值明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)5-FU的IC50值也明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);但是在觀測(cè)SGC7901細(xì)胞對(duì)5-FU的IC50值兩者之間沒(méi)有顯著的差異(p>0.05)。(4)添加NAC部分可以提高BSO作用后兩種細(xì)胞對(duì)5-FU的IC50值,與相對(duì)應(yīng)單用 BSO處理組之間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);同時(shí)觀察到NAC提高BSO預(yù)處理的SGC7901/DDP細(xì)胞中對(duì)

6、MMC的IC50值(p<0.05);然而在SGC7901細(xì)胞中這種差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。(5)SGC7901/DDP細(xì)胞內(nèi)GSH含量明顯高于SGC7901細(xì)胞內(nèi)GSH含量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。NAC單獨(dú)處理兩種細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi) GSH含量有明顯升高,與對(duì)照組比較差異顯著(p<0.05)。同樣的,通過(guò)不同濃度BSO處理后,兩種細(xì)胞內(nèi)的GSH含量大幅度的減少,并且BSO濃度越高,細(xì)胞內(nèi)GSH減少的越多,兩者之間呈現(xiàn)

7、獨(dú)立的濃度依賴關(guān)系,[敏感株(r=-0.771,p<0.01);耐藥株(r=-0.821,p<0.01)]。④后續(xù)的實(shí)驗(yàn)證明,通過(guò)添加NAC,可以部分提高BSO預(yù)處理后SGC7901/DDP及SGC7901細(xì)胞內(nèi) GSH的含量,與相對(duì)應(yīng)組比較有明顯差異(p<0.05),同時(shí)細(xì)胞內(nèi)GSH含量的變化基本上與SGC7901/DDP對(duì)化療藥物的敏感度變化一致,但是這種效應(yīng)在SGC7901細(xì)胞并沒(méi)有被完全顯現(xiàn)。(6)RT-PCR證實(shí)在耐藥株中通過(guò)

8、BSO預(yù)處理后,Mrp1基因表達(dá)減弱; NAC處理組Mrp1基因的表達(dá)增強(qiáng),相反這一效應(yīng)在SGC7901細(xì)胞中,沒(méi)有被觀察到。
　　結(jié)論:(1)SGC7901/DDP細(xì)胞不僅對(duì)順鉑耐藥,而且對(duì)5-FU及MMC均耐藥,是一株多藥耐藥細(xì)胞。(2)BSO處理后能增強(qiáng)SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)5-FU和MMC敏感性。(3)NAC降低SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)5-FU和MMC的敏感性,增強(qiáng)對(duì)藥物抵抗作用。(4)在SGC7901/DDP中