HBV-Alu-PCR對乙肝相關性肝癌中HBV整合位點的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：了解乙型肝炎病毒(HBV)感染與肝細胞癌(HCC)的關系，探討乙型肝炎病毒(HBV)在肝細胞染色體上的整合規(guī)律及其在肝癌形成中的作用，了解肝細胞癌的發(fā)生機制。應用HBV-Alu-PCR方法檢測肝細胞癌(HCC)中HBVDNA整合。 方法:提取乙肝相關性肝癌組織標本中的DNA為模板，設計HBV的亞基因片段X、C、S的引物以檢測其中的HBVDNA，這個產物包括游離形式的和整合形式的HBVDNA；然后再設計HBV的上游序列和人類

2、基因組Alu重復序列為引物，設計的引物中引入U堿基，應用巢式PCR的原理，利用降落PCR技術，使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法擴增出整合形式的HBV基因片段及其側翼的人基因組DNA片段，建立克隆整合的HBVDNA及其相鄰的細胞基因序列的PCR技術。PCR產物送生物公司測序，所獲結果經美國國家生物技術信息中心(national center forbiotechnology information NCBI)BLAST及MapVi

3、ewer檢索確定HBV整合在染色體上的精確位置。 結果:24份例HBsAg陽性的肝癌組織中，通過HBV-PCR方法幾乎均能檢測到HBV的X區(qū)和前C區(qū)，S區(qū)的檢測率也達70.8％(17/24)；使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法發(fā)現(xiàn)有15份存在HBVDNA整合現(xiàn)象，整合的標本中有11份正向插入宿主基因中，8份反向插入宿主基因中，其中有5份標本既有正向插入也有反向插入，從病毒基因分析，整合可發(fā)生于X基因的任何長度，且均以截短

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