Id1基因與乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖及VEGF表達(dá)關(guān)系的研究.pdf

1、【目的】：研究Idl基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞增殖能力及VEGF表達(dá)的影響，探討其在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用。 【方法】： 1．采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法將Idl-pcDNA3.1+/Hygro、Idl-pcDNA3.1-/ Hygro、pcDNA3.1轉(zhuǎn)染至乳腺癌MCF-7細(xì)胞中，利用潮霉素篩選到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及細(xì)胞免疫組織化學(xué)法(ABC)檢測Idl mRNA和Idl蛋白在不同轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá)狀

2、況。 2．應(yīng)用細(xì)胞計數(shù)及MMT法描繪生長曲線，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測正義、反義Idl轉(zhuǎn)染對MCF-7細(xì)胞細(xì)胞周期的影響，測定其增殖指數(shù)。 3．應(yīng)用細(xì)胞免疫組織化學(xué)法(ABC)及酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測MCF-7細(xì)胞中VEGF、的表達(dá)。 【結(jié)果】： 1．通過RT-PCR、細(xì)胞免疫組織化學(xué)法檢測顯示：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染正義Idl質(zhì)粒的MCF-7細(xì)胞Idl mRNA、Idl蛋白表達(dá)較對照組顯著增高(P<0.01)，

3、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染反義Idl組Idl mRNA、Idl蛋白表達(dá)較對照組顯著降低(P<0.01)，轉(zhuǎn)染空載體組則與對照組無明顯差異(p>0.05)。 2．細(xì)胞計數(shù)及MTT測定顯示：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染正義Idl組增殖速度較對照組明顯增快，在第3～5天最為顯著(P<0.01)，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染反義Idl組增殖速度較對照組明顯減慢(P<0.05)，轉(zhuǎn)染空載體組則與對照組無明顯差異(p>0.05)。 3．流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：與對照組相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染正義Id

4、l組增殖指數(shù)最高(48.45±2.978)％，有顯著性差異(p<0.05)，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染反義Idl組增殖指數(shù)最低(23.08±1.565)％，有顯著性差異(p<0.05)，轉(zhuǎn)染空載體組(32.4±0.469)％與對照組無明顯差異(p>0.05)。 4．細(xì)胞免疫組織化學(xué)法顯示：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染正義Idl組VEGF蛋白表達(dá)較對照組明顯增強(qiáng)(p<0.01)，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染反義Idl組VEGF蛋白表達(dá)較對照組明顯減少(p<0.01)，轉(zhuǎn)染空載體組與對照組

5、無明顯差異(p>0.05)。 5．ELISA檢測顯示：在各干預(yù)組細(xì)胞培養(yǎng)液中，VEGF濃度在一定時間內(nèi)隨時間的延長而遞增。在同一時間段與對照組相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染正義Idl組培養(yǎng)液中VEGF濃度顯著增高，具有顯著性差異(p<0.05)，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染反義Idl組培養(yǎng)液VEGF濃度明顯減低，具有顯著性差異(p<0.05)，轉(zhuǎn)染空載體組與對照組則無明顯差異(p>0.05)。 【結(jié)論】： 1．穩(wěn)定表達(dá)正義Idl真核表達(dá)載體的細(xì)胞系