左心耳組織內(nèi)炎癥介質(zhì)與風心病合并房顫的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的： 心房顫動(房顫，atrialfibrillation，AF)是臨床常見的一種心律失常，易引起血流動力學異常和體循環(huán)動脈栓塞，導致患者致殘、致死。近年來，對房顫的研究已成為熱點。但迄今為止，房顫的發(fā)病機制仍不完全清楚，治療方法和效果不理想。左心房是房顫發(fā)生的始動部位，房顫時左心房組織細胞結(jié)構(gòu)改變的程度，左心房組織細胞內(nèi)炎癥介質(zhì)的含量變化及其與左心房組織細胞結(jié)構(gòu)改變程度的相關(guān)性等，應(yīng)更能精確說明心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)與房顫的關(guān)系

2、，炎癥介質(zhì)與心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)及房顫的關(guān)系。有關(guān)這些方面的研究鮮見報道。 本文設(shè)計選擇全部是中、重度的風濕性心臟病二尖瓣病變患者，根據(jù)患者是否合并房顫將其分為兩組，同期選擇意外死亡的正常人作為對照組。觀察患者左心房組織細胞結(jié)構(gòu)的改變；檢測患者左心房組織細胞內(nèi)炎癥介質(zhì)含量的變化，比較分析患者左心房組織細胞內(nèi)炎癥介質(zhì)含量與左心房組織細胞結(jié)構(gòu)改變程度的相關(guān)性。同時檢測比較房顫組、竇性心律組患者血清炎癥介質(zhì)水平。這樣可以排除風濕、二尖瓣病變等

3、混雜因素的影響，從而進一步探討炎癥與心房重構(gòu)、房顫的關(guān)系。 方法： 1.病人選擇與分組： 1.1病人選擇標準：中、重度風濕性心臟病二尖瓣病變患者，年齡30～65歲，心功能NYHAII～Ⅲ級。擬行單純二尖瓣置換手術(shù)。 1.2病人排除標準：下列情況均予以排除： ①臨床有風濕活動征象； ②合并感染性心內(nèi)膜炎； ③合并腫瘤； ④甲狀腺機能亢進； ⑤肝、腎功能異常及其他器官功

4、能不全； ⑥全身任何部位有急慢炎癥性疾病； ⑦合并周圍血管性疾病或.栓塞性疾病； ⑧AF持續(xù)時間小于6個月。 1.3課題設(shè)計分組：選擇擬行二尖瓣置換手術(shù)患者20例，年齡31～63(50.25±10.42)歲，心功能NYHAII～Ⅲ級。所有患者術(shù)前均常規(guī)行血常規(guī)、血液生化、胸片、心電圖、超聲心動圖檢查。 2.左心耳肌組織樣本采集：在體外循環(huán)轉(zhuǎn)流前，結(jié)扎左心耳并切取部分左心耳組織。 3.左心耳

5、組織病理學檢測：標本以10％中性甲醛溶液固定，經(jīng)脫水、浸蠟后石蠟包埋。包埋石蠟塊常規(guī)5μm連續(xù)切片，撈片，60℃烤箱干燥。常規(guī)H-E染色、Masson三色染色。 4.左心耳組織內(nèi)炎癥介質(zhì)檢測 4.1免疫組織化學SABC法：即稀釋后的一抗與特異性抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物 ，再依次與生物素化二抗及鏈霉親和素過氧化物酶組成的復(fù)合物結(jié)合， 4.2Westernblotting法：稱取-80℃保存的左心耳組織100mg，

6、剪碎研磨，測定蛋白質(zhì)含量；然后制備SDS-聚丙烯酸胺凝膠電泳樣本制備， 5.外周血清標本的制備與檢測：所有對象于術(shù)前一日清晨空腹臥位抽取肘正中靜脈血6ml，4℃3000rpm離心15分鐘，分離血清后分別注入3個標本儲存管， 6.統(tǒng)計學方法：計量數(shù)據(jù)以均數(shù)士標準差(-x±s)表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析、兩組之間均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗， 結(jié)果： 1.房顫組患者和竇性心律組患者的性別、年齡、左室射血分

7、數(shù)和心功能分級(NYHA)等相比，兩組患者的性別、年齡、左室射血分數(shù)和心功能分級無顯著差異(P>0.05)： 2.房顫組患者和竇性心律組患者的左心耳心肌細胞直徑均增大，兩組與正常對照組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)； 3.房顫組患者左心耳間質(zhì)纖維組織增生，其與竇性心律組和正常對照組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)； 4.房顫組患者與竇性心律組患者外周血白細胞比較：兩組外周血白細胞(WBC)計數(shù)和中性

8、粒細胞百分比(NEU)之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 5.與竇性心律組患者相比，房顫組外周血炎癥介質(zhì)CRP、IL-6、TNF-α水平未增高，兩組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。這與房顫組左心耳組織內(nèi)炎癥介質(zhì)含量升高不相平行。 6.免疫組化染色及其(IOD)值：正常對照組左心耳組織內(nèi)幾乎未見到ClIP、IL-6、TNF-α染色顆粒；竇性心律組患者左心耳組織內(nèi)可見到較多CRP、IL-6、TNF-α染色顆粒；

9、 7.Westernblotting檢測及其(IOD)值：房顫組左心耳組織內(nèi)CRP、IL-6、TNF-α表達高于竇性心律組及正常對照組，房顫組與竇性心律組、正常對照組之間的差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 8.炎癥介質(zhì)與左心耳組織結(jié)構(gòu)改變的相關(guān)性分析：免疫組化法檢測的左心耳組織內(nèi)炎癥介質(zhì)CRP、IL-6、TNF-αIOD值與左心耳心肌細胞直徑呈正相關(guān) 結(jié)論： 1.心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)與房顫的發(fā)生和維持密切相關(guān)，

10、風濕性心臟病二尖瓣病變合并房顫時心房重構(gòu)的主要特征性改變是：心房心肌細胞肥大、心房組織間質(zhì)纖維化。 2.風濕性心臟病二尖瓣病變合并房顫時，病人左心房擴大主要與其自身二尖瓣病變引起的血流動力學改變有關(guān)，可能與房顫的維持相關(guān)而與房顫的發(fā)生關(guān)系不密切。 3.風濕性心臟病二尖瓣病變患者左心房組織發(fā)生“類結(jié)構(gòu)重構(gòu)樣”改變，可能是二尖瓣病變易發(fā)生房顫的病理基礎(chǔ)。合并房顫的患者，其左心房肌細胞增大明顯，是左心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的主要改變，其細

11、胞明顯增大的機理有待進一步研究。 4.風濕性心臟病二尖瓣病變可發(fā)生左心房擴大，左心房心肌細胞肥大，但其不能引起左心房心肌間質(zhì)纖維化，左心房心肌間質(zhì)纖維化是房顫、心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的獨特改變。說明左心房心肌間質(zhì)纖維化與房顫關(guān)系更為密切。因此，對心房間質(zhì)纖維化的發(fā)生機制及其與房顫的因果關(guān)系應(yīng)進一步研究。 5.房顫病人左心房組織內(nèi)內(nèi)炎癥介質(zhì)含量明顯升高，進一步證實了炎癥與房顫密切相關(guān)。 6.房顫時左心房組織水平發(fā)生以左心房心

12、肌細胞肥大和間質(zhì)纖維化為主要特征的心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)；左心房心肌細胞肥大程度和間質(zhì)纖維化程度與左心房組織內(nèi)炎癥介質(zhì)含量呈正相關(guān)。說明炎癥與心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)密切相關(guān)，提示炎癥通過影響心房重構(gòu)而參與房顫的發(fā)生和維持。 7.房顫時血清CRP、IL-6、TNF-α水平無明顯升高，說明房顫時，患者機體可能保持于低水平炎癥狀態(tài)，房顫的發(fā)生、維持與機體整體炎癥狀態(tài)水平的高低無關(guān)，而與心肌局部的炎癥狀態(tài)有關(guān)。 8.房顫時血清CRP、IL-6、TN