雞TLR3信號通路在IBDV致雛雞法氏囊免疫損傷中的作用研究.pdf

1、為了探討chTLR3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在傳染性法氏囊病病毒(IBDV)致雛雞法氏囊免疫損傷機制中的作用，本試驗將75只SPF雛雞隨機分為3組，每組25只，分別為感染組、疫苗組和對照組。嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)。感染組雛雞經(jīng)點眼滴鼻途徑，感染IBDV標(biāo)準(zhǔn)毒株，0.6ml/只。疫苗組經(jīng)相同途徑給予雛雞IBDV活疫苗，2羽份/只。對照組經(jīng)相同途徑給予PBS，0.6ml/只。于感染后第1、4、7、21及35天每組隨機抽取5只雛雞心臟采血處死，快速采取法氏囊于-8

2、0℃保存。采用實時熒光定量PCR技術(shù)對法氏囊中的chTLR3、chTLR3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)信號分子(chMyD88、chTRIF和chNF-κB)及細(xì)胞因子（chTNF-α、chIL-1β、chIL-6、chIFN-β）的mRNA表達(dá)變化進(jìn)行檢測;采用間接免疫熒光技術(shù)對法氏囊中的chTLR3蛋白表達(dá)以及T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞數(shù)量變化進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，感染組與疫苗組雛雞法氏囊中chTLR3 mRNA的相對表達(dá)量及其蛋白表達(dá)

3、量在感染IBDV或接種IBDV活疫苗后均呈現(xiàn)先上升后降低的趨勢，并于第4天達(dá)到峰值（P＜0.01或P＜0.05）。表明chTLR3參與IBDV感染雛雞的過程。感染組雛雞法氏囊中的chTLR3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)信號分子的相對表達(dá)量在感染初期均顯著高于對照組(P＜0.01或P＜0.05)，并皆于第4天達(dá)到峰值，之后逐漸下降。其中，chMyD88與chTRIF相比上調(diào)的幅度小、時間短，表明chTLR3主要接頭蛋白分子為chTRIF。感染組及疫苗

4、組雛雞法氏囊中細(xì)胞因子的表達(dá)趨勢與chTLR3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)信號分子基本一致，即呈現(xiàn)先上調(diào)后下降的規(guī)律。
　　適應(yīng)性免疫相關(guān)指標(biāo)結(jié)果顯示，感染組雛雞感染IBDV后第1-7d，法氏囊中T淋巴細(xì)胞數(shù)量逐漸增加且極顯著高于對照組（P＜0.01），但于第21天顯著低于對照組(P＜0.05)，第35天雖有所上升但仍顯著低于對照組(P＜0.05);疫苗組雛雞接種IBDV疫苗后法氏囊中T淋巴細(xì)胞數(shù)量于接種后第1天開始上升，第4天達(dá)到峰值(P＜

5、0.05)，之后逐漸下降，于第21天恢復(fù)正常(P＞0.05)。結(jié)果顯示，感染初期細(xì)胞因子相對表達(dá)量與T淋巴細(xì)胞數(shù)量均呈上升趨勢。感染組雛雞法氏囊中B淋巴細(xì)胞數(shù)量在感染IBDV后第1天便極顯著低于對照組(P＜0.01)并逐漸降低，第21天雖有所升高但仍然極顯著低于對照組（P＜0.01），之后逐漸恢復(fù);疫苗組雛雞法氏囊B淋巴細(xì)胞數(shù)量在接種后第1-7d均顯著低于對照組(P＜0.05)，但整體呈現(xiàn)逐漸升高狀態(tài)。結(jié)果顯示，在感染后期細(xì)胞因子（IF

6、N-β除外）相對表達(dá)量與B淋巴細(xì)胞數(shù)量均呈上升趨勢。上述結(jié)果表明，chTLR3可通過下游細(xì)胞因子在感染早期參與誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的發(fā)生，在感染晚期參與誘導(dǎo)體液免疫的發(fā)生。
　　另外，感染組雛雞巨噬細(xì)胞數(shù)量在感染后第1-7d顯著高于對照組（P＜0.01或P＜0.05），第21天顯著低于對照組（P＜0.05），第35天恢復(fù)。疫苗組雛雞巨噬細(xì)胞數(shù)量呈先升高后降低趨勢，于接種后第7天恢復(fù)。結(jié)果顯示，chTLR3相對表達(dá)量與巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞數(shù)