IL-1R-TLR信號通路在糖尿病大鼠頸動脈損傷中的作用.pdf

1、目的：研究IL-1R-TLR信號通路在GK(Goto Kakiski Wistar)及Wistar大鼠頸動脈球囊損傷后的新生內(nèi)膜增生中的作用，并觀察其在兩者之間的差異，為防治糖尿病患者PTCA或者PCI后的再狹窄提供理論基礎。
　　方法：使用GK大鼠和Wistar大鼠做為糖尿病及非糖尿病大鼠，行大鼠頸總動脈球囊損傷術，在球囊損傷后的1、3、7、21天取損傷側(cè)頸總動脈，使用多聚甲醛固定后石蠟包埋。
　　(1)使用H-E染色及E

2、.V.G染色對組織切片進行染色，觀察球囊損傷前后的頸總動脈新生內(nèi)膜增生的程度。
　　(2)免疫組化染色觀察組織中IRAK-1、p-IRAK-1、NFκB p65的表達情況。
　　(3)免疫組化染色觀察組織中PCNA的表達情況。
　　(4)使用EdU染色試劑盒對組織切片進行染色，觀察不同時間點EdU陽性細胞數(shù)。同時，我們使用不同的劑量及注射方法觀察EdU染色的結(jié)果。
　　結(jié)果：(1)H-E及E.VG染色并計算N/M

3、值，結(jié)果顯示，與GK及Wistar大鼠球囊損傷前相比(0.16±0.04、0.13±0.04)，在球囊損傷后的7天(25.07±2.49、12.30±1.31)、21天(139.20±11.75、41.95±4.15)可以觀測到新生內(nèi)膜增生，21天較7天更為明顯，同時可以觀察到GK大鼠的增生較Wistar大鼠明顯(P<0.05)。
　　(2)免疫組化染色觀察到IRAK-1在GK及Wistar大鼠球囊損傷前的頸動脈標本中無表達(1.

4、74±0.20、1.84±0.15)，損傷后1天明顯增強(29.44±3.03、20.54±2.86)，3天表達減少(10.20±1.29、6.98±0.85)，7天基本無表達(3.92±0.41、2.04±0.27)。與損傷前相比(1.28±0.13、1.03±0.12)，p-IRAK-1在損傷后的1天(10.54±1.23、4.56±0.58)、3天(19.08±1.99、11.89±1.38)、7天(29.75±3.38、20.8

5、7±2.31)較球囊損傷前(1.28±0.13、1.03±0.12)逐漸增強。與損傷前相比(1.52±0.14、1.43±0.14)，NFκB p65在損傷后的1天(8.38±0.91、4.85±0.56)、3天(21.69±2.85、12.47±1.43)、7天(31.74±3.62、20.34±2.33)表達也逐漸增強。同時發(fā)現(xiàn)上述蛋白的表達GK較Wistar大鼠更明顯(P<0.05)。
　　(3)免疫組化染色觀察到PCNA在

6、GK及Wistar大鼠球囊損傷前的頸動脈標本中基本無表達(3.83±1.01、2.83±0.70)，在損傷后的1天開始表達(25.67±3.07、16.00±1.57)，3天表達達到高峰(48.17±3.89、27.50±2.58)、7天稍有下降(24.83±2.83、14.50±1.54)。同時可觀察到GK較Wistar更明顯(P<0.05)。
　　(4)EdU染色顯示，與GK及Wistar大鼠球囊損傷前相比(3.43±0.55

7、、3.23±0.60)，在球囊損傷后的1天(23.29±2.98、16.78±1.90)、3天(50.23±4.54、31.09±2.83)EdU陽性細胞數(shù)逐漸增多，7天(22.44±3.00、13.22±1.24)稍有下降。且GK較Wistar大鼠更加明顯(P<0.05)。
　　(5)在EdU染色中，不同注射劑量組之間，100mg/kg組較25mg/kg及50mg/kg組，陽性細胞數(shù)明顯增加。同時，多次注射組較單次注射組陽性細胞