TLR4在糖尿病大鼠脊髓中的表達及其意義.pdf

1、目的：研究Toll樣受體4（TLR4）在糖尿病大鼠脊髓中的表達變化，探討TLR4與糖尿病并發(fā)癥神經(jīng)病理性疼痛的關系。
　　方法：84只SPF級SD雄性大鼠，體重180-200g,將大鼠隨機分為兩組：正常對照組（C組，n=42）和糖尿病組（DM組，n=42）。大鼠禁食14h后DM組按65mg/kg一次性腹腔注射PH=4.38、濃度為1％的鏈脲佐菌素（STZ）溶液，C組腹腔注射相同劑量的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液。一周后斷尾取血測血糖，空

2、腹血糖﹥16.7 mmol/L的大鼠為糖尿病模型制備成功。分別在0w、1w、2w、3w、4w、6w、8w時測定大鼠體重、血糖,用電子測痛儀測定機械痛閾，采用ⅡT336型甩尾足底測試儀測定熱痛閾。每組測定完上述指標后隨機取6只大鼠，用10%的水合氯醛按200mg/kg腹腔內注射麻醉SD大鼠，快速取L4-6節(jié)段脊髓放入液態(tài)氮中保存。通過PCR基因擴增儀用RT-PCR法測定大鼠L4-6脊髓TLR4的相對表達量，ELISA法檢測脊髓TNF-α、

3、IL-1β的變化，用SPSS17.0統(tǒng)計結果。
　　結果：與制模前相比，DM組腹腔注射STZ后1w、2w、3w、4w、6w、8w時血糖濃度顯著升高，C組血糖無明顯變化；DM組腹腔注射STZ后體重逐漸下降，C組體重逐漸增加。DM組機械痛閾在2w、3w、4w呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，4w時降至最低并持續(xù)至8w,顯著低于C組(P<0．05)； DM組熱痛閾在4w明顯降低并持續(xù)至8w，低于C組（P<0．05)，但8w時熱痛閾較前又有回升，比6w時

4、顯著升高(P<0．05). DM組L4-6脊髓TLR4表達出現(xiàn)上調，并且1w、2w、3w、4w呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，6w、8w又呈現(xiàn)逐漸下降趨勢,1w、2w、3w、4w、6w時TLR4表達均高于C組(P<0．05)，其中在4w時上升至最高；DM組L4-6脊髓TNF-α表達在1w、2w、3w、4w、6w、8w比C組顯著升高(P<0．05)；DM組L4-6脊髓IL-1β在1w、2w、3w、4w、6w、8w比C組顯著升高(P<0．05)。將DM組

5、所有相對定量檢測的L4-6脊髓TLR4表達與其處死前所測得的機械痛閾和熱痛閾進行 Spearman線性相關性分析顯示：DM組0w、1w、2w、3w、4w脊髓 TLR4表達與機械痛閾呈負相關(r=-0．941)(P<0．05)，與熱痛閾負相關(r=-0.907)(P<0．05)；6w、8w脊髓TLR4表達與機械痛閾和熱痛閾無相關性。將DM組所有相對定量檢測的L4-6脊髓TLR4表達與TNF-α和IL-1β進行Spearman線性相關性分析

6、顯示：DM組0w、1w、2w、3w、4wTLR4表達與TNF-α呈正相關(r=0．98)(P<0．05)，與IL-1β呈正相關(r=0．87)(P<0．05)；6w、8w脊髓TLR4表達與TNF-α和IL-1β無相關性。將DM組相對定量檢測的L4-6脊髓TNF-α和IL-1β的表達與機械痛閾、熱痛閾進行Spearman線性相關性分析顯示:DM組0w、1w、2w、3w、4w、6w、8w脊髓TNF-α表達與機械痛閾成負相關(r=-0.929