2型糖尿病大鼠vWF的動態(tài)變化及其意義.pdf

1、目的：近年來，2型糖尿病的發(fā)病率日益增加，而影響病人預后的主要因素在于其慢性并發(fā)癥出現(xiàn)的早晚及其嚴重程度，糖尿病并發(fā)癥的出現(xiàn)與全身大血管及微血管的功能異常密切相關。隨著對糖尿病發(fā)病機制研究的深入，內(nèi)皮細胞受損在血管并發(fā)癥發(fā)病過程中所起的作用越來越受到重視。假性血友病因子(vWF)升高被認為是血管內(nèi)皮細胞損傷的標志之一。vWF是一種主要由內(nèi)皮細胞、巨核細胞合成和分泌的糖蛋白，一方面，vWF作為凝血Ⅷ因子的載體，延長了Ⅷ因子的半衰期，有助于

2、保持Ⅷ因子的活性，有助于內(nèi)源途徑生成凝血酶而加強凝血，另一方面vWF作為血小板與損傷內(nèi)皮細胞黏附的“橋梁”，參與血小板黏附并進一步聚集于受損的內(nèi)皮細胞，啟動血栓形成的第一步。 本研究的目的是通過建立2型糖尿病大鼠模型，檢測其成模后0、4、8、12、16周的vWF濃度，以了解糖尿病大鼠隨病程進展vWF的變化趨勢，并進一步探討糖尿病大鼠vWF濃度變化與血小板活化及血栓形成之間的關系，為臨床預防及早期發(fā)現(xiàn)糖尿病患者血栓性并發(fā)癥提供客觀

3、依據(jù)。 方法：健康7周齡清潔級近交系Wistar大鼠120只(河北醫(yī)科大學試驗動物中心提供)，體重180-220g，雌雄各半，隨機分為兩組：正常組(control group，CON)50只，雌雄各半，作為對照；實驗組(trial group,TRI)70只，雌雄各半。正常組動物喂養(yǎng)普通飼料：蛋白質(zhì)占23％，碳水化合物占50％，脂肪占5％；實驗組動物喂養(yǎng)高脂飼料：在10000g普通飼料中加入150g食鹽、50g白糖、2000g豬

4、油、400g麻油、2000g花生、900g雞蛋，其碳水化合物48％，脂肪22％，蛋白質(zhì)20％。2月后實驗組大鼠腹腔注射30mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)(以PH4.4的0.1mol/L檸檬酸鈉緩沖液配制成1％濃度)，正常組大鼠腹腔注射同等量的檸檬酸鈉緩沖液。一周后給所有動物做口服葡萄糖耐量試驗(大鼠禁食12h后尾靜脈取血測空腹血糖，然后按2g/kg體重灌胃50％葡萄糖溶液，2h后尾靜脈取血測2h血糖)，空腹血糖≥7.0mmol/l，糖負

5、荷后2小時血糖≥11.1mmol/l者為造模成功。從造模成功者中選取血糖較高的大鼠50只(雌雄各半)納入正式試驗，作為糖尿病組(diabetes group，DIA)。采用隨機數(shù)字表隨機將正常組和糖尿病組各分為0周、4周、8周、12周、16周5組，每組10只，雌雄各半，分別于以上時段空腹取血測定觀測值。正常組一直喂普通飼料，糖尿病組繼續(xù)喂高脂飼料，以防血糖回落，每2周測體重和空腹血糖(均為禁食10-12小時，尾靜脈取血)，空腹血糖<7.

6、0mmol/l為剔除條件。于試驗第0、4、8、12、16周末，大鼠禁食10-12小時后，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，下腔靜脈取血5-10ml注入EDTA抗凝試管內(nèi)，3000轉/分離心10分鐘，取上清液，-80℃冰箱保存。待標本收集齊全后同批測定。vWF濃度(ELASA法)。另同時取大鼠尿液約1ml及尾靜脈血10μ1，使用DCA2000+測定尿微量白蛋白及HbA1c。 所用數(shù)據(jù)輸入SAS統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計，計量資料用均數(shù)±標準差表

7、示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析和Q檢驗，兩者之間相關性關系采用直線相關分析。P<0.05為統(tǒng)計學有顯著性差異。 結果： 1.成模前正常組大鼠隨年齡增長，體重穩(wěn)定增加，血糖值均在正常范圍；試驗組大鼠體重增長較正常組快，但血糖值亦在正常范圍。 2.正常組大鼠隨年齡增長，體重增加，血糖值穩(wěn)定，均在正常范圍，各時間段之間無明顯差別。糖尿病組大鼠隨著病情的進展血糖值處于較高水平，無明顯增高或降低，各

8、時間段之間無明顯差別(P>0.05)；糖尿病組大鼠成模后體重增加，與正常組同時段比無明顯差異。 3.正常組大鼠各時間段vWF濃度無明顯變化；糖尿病組大鼠在成模0周時vWF水平已有升高趨勢，但無統(tǒng)計學差異，由4周開始vWF水平相對于對照組明顯升高(P<0.05)，各時間段相比隨病程延長濃度逐漸增高，8周開始較前一時間段差異有統(tǒng)計學意義。糖尿病組大鼠HbA1c與vWF濃度呈正相關(r=0.712)(p<0.01)；vWF濃度與尿微量