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文檔簡介
1、目的:
測(cè)定鏈脲佐菌素處理后造成糖尿病狀態(tài)的大鼠和正常大鼠椎間盤組織中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)和胰島素樣生長因子-1(IGF-1)在三個(gè)不同時(shí)期的含量變化,并探討含量之間差異的意義。
方法:
13月齡成熟雄性SD大鼠30只,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組以及對(duì)照組,每組SD大鼠各15只,實(shí)驗(yàn)組SD大鼠采用腹腔單次注射鏈脲佐菌素溶液(strep-tozotoein,STZ),通過鏈脲佐菌素對(duì)胰腺胰島β-細(xì)胞的制毒作用,致
2、使胰島素生成障礙,從而造成糖尿病狀態(tài),建立糖尿病大鼠模型,對(duì)照組SD大鼠不做特殊處理,僅給予腹腔單次注射檸檬酸鹽緩沖液。
2分別在第2、4、6周時(shí),從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各取5只大鼠,用1%戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔注射處死大鼠后,取其各組SD大鼠新鮮腰椎間盤組織,用4%多聚甲醛進(jìn)行固定,梯度乙醇脫水,包埋成石蠟組織塊。分別行蘇木素-伊紅(HE)染色法,二甲苯透明后,中性樹脂封片顯微鏡下觀察兩組大鼠椎間盤組織病理變化情況。免疫組化法,脫蠟加
3、入一抗二抗后,辣根酶標(biāo)記,DAB顯色顯微鏡下觀察兩組大鼠椎間盤組織中TGF-β和IGF-1的含量。選取其中最有意義的,陽性表達(dá)最強(qiáng)的5個(gè)視野進(jìn)行計(jì)算,以細(xì)胞質(zhì)著色和陽性細(xì)胞率為判斷標(biāo)準(zhǔn),統(tǒng)計(jì)兩組大鼠椎間盤中TGF-β和IGF-1的表達(dá)情況。
結(jié)果:
1經(jīng)鏈脲佐菌素注射液處理后的糖尿病組模型大鼠,血糖濃度明顯升高,與正常組對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。糖尿病組血糖濃度分別在第2、4、6周時(shí)相對(duì)于正常組,差異有
4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2在3個(gè)不同時(shí)期,實(shí)驗(yàn)組大鼠的椎間盤均出現(xiàn)不同程度的退行性改變,HE染色顯示可見脊索細(xì)胞減少,增生出較多膠原纖維,終板呈不同程度的鈣化,出現(xiàn)類軟骨細(xì)胞,纖維環(huán)呈蜿蜒狀排列,髓核基質(zhì)排列紊亂、減少,呈不同程度的皺縮,髓核及纖維環(huán)向外膨出;部分髓核細(xì)胞排列成簇,這是椎間盤退變的標(biāo)志。而對(duì)照組正常大鼠,椎間盤結(jié)構(gòu)正常,終板由一層透明軟骨組成,纖維環(huán)具有規(guī)則的層狀結(jié)構(gòu),膠原束排列整齊平行,以成纖維細(xì)胞為主
5、,髓核與纖維環(huán)分界清楚,其中成條索狀分布的脊索細(xì)胞較為豐富,基質(zhì)中細(xì)胞充實(shí)。
3免疫組化法測(cè)定,對(duì)照組大鼠中TGF-β染色陽性率在3個(gè)不同時(shí)期無差異(P=0.368),對(duì)照組大鼠中IGF-1染色陽性率在3個(gè)不同時(shí)期無差異(P=0.368);實(shí)驗(yàn)組大鼠中TGF-β的陽性染色率在3個(gè)不同時(shí)期無差異(P=0.311),實(shí)驗(yàn)組大鼠中IGF-1的陽性染色率在3個(gè)不同時(shí)期無差異(P=0.727)。實(shí)驗(yàn)組大鼠椎間盤組織中TGF-β的含量在3
6、個(gè)不同時(shí)期均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組大鼠椎間盤組織中IGF-1的含量在3個(gè)不同時(shí)期均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。
結(jié)論:
本研究結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組中STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠椎間盤中TGF-β和IGF-1含量較對(duì)照組正常大鼠明顯減少,在椎間盤HE染色中可以觀察到,實(shí)驗(yàn)組糖尿病大鼠椎間盤的形態(tài)發(fā)生了退變性改變,這種TGF-β和IGF-1含量的降低,引起了椎間盤內(nèi)基質(zhì)的降解,抑制軟骨基質(zhì)的合成,使其未分化間充質(zhì)
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