TSP-1活化TGF-β1在糖尿病大鼠腎臟中的實驗研究.pdf

1、目的： 研究在糖尿病大鼠腎臟中TSP-1表達是否增高，是否導致活性TGF-β1增高，阻斷TSP-1介導的TGF-β1活化能否延緩糖尿病腎病的纖維化進程，從而為臨床上糖尿病腎病的防治提供新的思路。 方法： 選取健康雄性Wistar大鼠42只，隨機分成模型組和正常對照組（A組），用鏈脲佐菌素（STZ）按60mg/kg一次性腹腔注射誘導糖尿病模型，將糖尿病模型組大鼠隨機分為糖尿病大鼠對照組（B組）和糖尿病大鼠治療組（C

2、組），藥物治療組從STZ注射糖尿病模型建立成功后即刻開始給于TSP-1特異性拮抗劑即：人工合成多肽（LSKL）100μg/d皮下注射，直至實驗結束，未治療組B組和正常對照組A組大鼠給予同等劑量生理鹽水，分別測定治療不同時期糖尿病大鼠C組血肌酐、肌酐清除率、血脂、空腹血糖、糖化血紅蛋白、24 h尿蛋白定量、尿微量白蛋白排泄率（UAER）與A組、B組同時期結果進行比較。第24周用HE及PAS染色觀察各組腎臟病理形態(tài)學改變、測定腎重、腎臟肥大

3、指數(shù)（KW/BW）及免疫組化檢測TSP-1和TGF-β1，并對二者作Pearson直線相關回歸分析。 結果: （1）大鼠存活情況：正常對照組（A組）全部存活；糖尿病腎病對照組（B組）第20、51、93、108天各死亡1只；糖尿病腎病治療組（C組）第98天死亡1只； （2）-般狀況：正常對照組（A組）大鼠狀態(tài)良好，毛色光澤，反應靈敏，體重增加。糖尿病大鼠對照組（B組）大鼠出現(xiàn)典型攝食量、飲水量及尿量增加，體重明顯減

4、輕的糖尿病“三多一少”癥狀（相對于同時期A組大鼠），毛色灰暗無光澤，活動量少，有2只大鼠出現(xiàn)白內障，1只大鼠反復腹瀉，4只大鼠實驗過程中死亡。與B組大鼠同時期比較，C組大鼠“三多一少”癥狀明顯改善，毛色光澤，體重增加，提示LSKL能在一定程度上控制糖尿病癥狀； （3）分別測定糖尿病腎病治療組（C組）不同時期24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白排泄率、血清肌酐及腎功能情況與B組相比較明顯降低，差別顯著（P<0.01）：但比同期正常對照組

5、略高，差別顯著（P<0.01）； （4）血糖、糖化血紅蛋白及血脂情況：各糖尿病組（B組和C組）大鼠的血糖、糖化血紅蛋白及血脂均較正常對照組大鼠（A組）明顯升高（P<0.01），而各糖尿病組之間血糖并無顯著差異（P>0.05），C組糖化血紅蛋白及血脂較B組有不同程度的下降（P<0.05）； （5）第24周時分別觀察三組大鼠腎組織病理形態(tài)學改變（腎小球硬化、間質纖維化、腎小管萎縮、血管內膜病變等），測定腎重、腎臟肥大指數(shù)（K

6、W/BW）、腎小球平均體積（MGV）、系膜面積比（FMA），糖尿病腎病治療組（C組）明顯較輕，與B組相比，差別顯著（P<0.05）；但糖尿病腎病組（B組和C組）以上改變均較正常對照組（A組）明顯加重，差別顯著（P<0.05）： （6）第24周時運用免疫組化方法觀察腎組織TSP-1在正常對照組無陽性表達，TGF-β1僅有少量表達，而糖尿病腎病組（B組、C組）TSP-1在腎小管上皮細胞胞漿、腎小球壁層上皮細胞內陽性表達，在炎性浸潤及

7、纖維化的間質區(qū)表達更明顯，與正常對照組（A組）相比，差別顯著（P<0.01）； TGF-β1陽性表達面積也顯著增強，可見于腎小球系膜細胞、腎小球壁層上皮細胞、腎小管上皮細胞、腎間質細胞，與正常對照組相比，差別顯著（P<0.01）；糖尿病治療組、糖尿病對照組TSP-1、TGF-β1陽性表達面積及強度差別顯著（P<0.05），TSP-1與TGF-β1陽性表達經Pearson直線相關回歸分析具有正相關（r=0.476，P<0.05）。