楊梅果實(shí)酚類物質(zhì)提取物降糖活性及其相關(guān)機(jī)理研究.pdf

1、本論文以楊梅（Myrica rubra Sieb et.Zucc）果實(shí)為材料，研究了17個(gè)品種果肉的總酚、總黃酮含量和抗氧化活性，并對(duì)其主要酚類物質(zhì)進(jìn)行了定性和定量;利用人肝癌HepG2細(xì)胞模型，評(píng)價(jià)了不同品種楊梅果實(shí)酚類物質(zhì)提取物體外促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗的活性，篩選出具有降糖潛力的楊梅品種，分析了發(fā)揮降糖活性的可能的主效成分;利用糖尿病小鼠模型，評(píng)價(jià)了‘荸薺’楊梅果實(shí)酚類物質(zhì)提取物的體內(nèi)降糖活性;進(jìn)一步利用體外和體內(nèi)模型，研究了‘荸薺’

2、楊梅果實(shí)降糖活性相關(guān)作用機(jī)制。主要結(jié)果如下:
　　1)不同品種楊梅果實(shí)總酚、總黃酮含量以及抗氧化活性差異顯著，其中‘荸薺’、‘炭梅’、‘慈薺’、‘晚稻’等深色果肉品種總酚、總黃酮含量較高，而‘粉紅’、‘水晶’等淺色果肉品種酚類物質(zhì)含量較低。利用高效液相色譜(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)，在‘荸薺’果實(shí)中鑒定了12種酚類物質(zhì)，包括5種花色苷類物質(zhì)，即飛燕草色素己糖苷、矢車(chē)菊素-3-O-半乳糖苷、矢車(chē)菊素-3-O-

3、葡萄糖苷、天竺葵色素-3-O-葡萄糖苷、芍藥色素-3-O-葡萄糖苷和7種黃酮醇糖苷類物質(zhì)，即楊梅素-3-O-鼠李糖苷、楊梅素脫氧己糖苷沒(méi)食子酸酯、槲皮素-3-O-半乳糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-半乳糖苷和山奈酚-3-O-葡萄糖苷。酚類物質(zhì)組成和含量在不同品種間差異顯著。不同品種楊梅果實(shí)抗氧化活性與總酚、總黃酮含量呈顯著正相關(guān)關(guān)系。
　　2)利用人肝癌HepG2細(xì)胞模型，評(píng)價(jià)了9個(gè)楊梅品

4、種果實(shí)酚類物質(zhì)提取物和5種主要酚類化合物單體促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗的活性。結(jié)果表明，不同品種楊梅果實(shí)酚類物質(zhì)提取物促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗的活性差異顯著，‘炭梅’、‘荸薺’、‘慈薺’等品種提取物促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗活性較強(qiáng)，這與其較高的總酚、總黃酮含量及DPPH·自由基清除能力呈顯著正相關(guān)關(guān)系。進(jìn)一步研究表明，矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷和3種槲皮素糖苷單體均表現(xiàn)出顯著促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗活性，而楊梅素-3-O-葡萄糖苷該活性不顯著。相關(guān)性分析結(jié)果表明

5、，不同品種楊梅果實(shí)提取物的葡萄糖消耗活性與其矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量(R2=0.922)和3種槲皮素糖苷單體總含量(R2=0.847)呈顯著正相關(guān)性。因此，矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷和槲皮素糖苷單體可能是楊梅果實(shí)提取物促進(jìn)HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的主效組分。
　　3)利用KK-Ay糖尿病小鼠模型，研究了‘荸薺’果實(shí)酚類物質(zhì)提取物(200mg/kg BW)的體內(nèi)降糖活性。結(jié)果表明，‘荸薺’果實(shí)提取物飼喂糖尿病小鼠5周能夠顯著降

6、低小鼠的空腹血糖水平，提高其口服糖耐量和胰島素敏感性，顯著降低血清胰島素、胰高血糖素和瘦素濃度等糖代謝相關(guān)指標(biāo)。此外，‘荸薺’果實(shí)提取物還能顯著降低糖尿病小鼠的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和IL-1β水平，顯著降低小鼠肝臟重量、肝臟脂質(zhì)含量，緩解糖尿病小鼠肝脂肪變性等癥狀。
　　4)對(duì)‘荸薺’果實(shí)酚類物質(zhì)提取物的降糖作用機(jī)制進(jìn)行了初步探索。體外HepG2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，0.4-10μg/ml的‘荸薺’果實(shí)提取

7、物能夠顯著抑制細(xì)胞糖異生作用、增強(qiáng)細(xì)胞糖酵解能力;這可能與其激活A(yù)MPK蛋白磷酸化、抑制下游糖異生相關(guān)PGC-1α、PEPCK和G6Pase基因表達(dá)有關(guān)。KK-Ay小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，‘荸薺’果實(shí)提取物同樣能夠顯著激活A(yù)MPK蛋白磷酸化、抑制小鼠肝臟PGC-1α和PEPCK基因表達(dá)。此外，‘荸薺’果實(shí)提取物顯著下調(diào)小鼠肝臟組織中脂質(zhì)代謝相關(guān)PAP、ACAT和CIDEA等基因和炎癥因子TNFα、IL-6和MCP-1等基因表達(dá)水平。以上結(jié)果表