音猥因子通過下調(diào)pRb的表達水平促進哺乳動物耳蝸毛細胞再生.pdf

1、[目的]耳毒性藥物及噪聲所引起的毛細胞丟失是感音神經(jīng)性耳聾的主要致病原因。但與低等非脊椎動物不同，哺乳動物耳蝸毛細胞無自發(fā)性再生能力，因此毛細胞丟失所導致的感音神經(jīng)性耳聾目前仍是臨床治療中的一大難題。找到促進哺乳動物耳蝸毛細胞原位再生的生物學途徑是治療感音神經(jīng)性耳聾的重要研究方向。
　　[方法]本實驗采用新生SD大鼠體外耳蝸培養(yǎng)模型，研究Shh在促進新生哺乳動物耳蝸毛細胞及支持細胞再生中的作用及其機制。為了進一步研究誘導成年耳蝸再

2、生的方法，我們采用Er-Cre Rb loxp/loxp轉(zhuǎn)基因鼠，在體外培養(yǎng)模型中敲除Rb1基因，研究其對成年耳蝸毛細胞及支持細胞再生中的促進作用。
　　[結(jié)果]1）.在新生大鼠耳蝸新霉素損傷體外模型中，Shh蛋白可促進支持細胞增殖，部分增殖的支持細胞可轉(zhuǎn)分化為毛細胞，新生毛細胞表達前體細胞標記物Pax2與Sox2。2）.通過RT-PCR研究方法，顯示新生耳蝸體外培養(yǎng)中加入Shh蛋白可成功激活Hh信號通路，使其下游多種作用因子表達

3、上調(diào)，從而進一步產(chǎn)生對細胞增殖與分化的調(diào)控作用。3).Shh通過抑制pRb功能促進毛細胞再生。Shh通過抑制pRb蛋白的表達及促進其過磷酸化兩個方面同時抑制pRb的功能。并誘導細胞周期蛋白Cyclin B1，Cyclin D2，Cyclin D3和Cdc2的上調(diào)，從而促進靜止期細胞重新進入細胞周期。4）.在成年小鼠內(nèi)耳感覺上皮體外培養(yǎng)模型中，Rb1敲除能夠促進耳蝸和橢圓囊的支持細胞及毛細胞增殖。
　　[結(jié)論]1）.Shh可促進毛細