人工感染鴿源禽Ⅰ型副粘病毒對鴿免疫機能的作用機制.pdf

1、鴿源禽Ⅰ型副粘病毒(Pigeon Paramyxovirus typeⅠ，PPMV-1)，又稱鴿源新城疫病毒(Pigeon Newcastle Disease Virus)，是危害養(yǎng)鴿業(yè)的主要疫病之一，能夠引起鴿急性、熱性的高度接觸性傳染病，具有較高的發(fā)病率和死亡率。目前，我國鴿子的養(yǎng)殖模式主要以散戶為主，飼養(yǎng)環(huán)境簡陋、免疫程序不規(guī)范、很容易受到病毒等病原微生物的感染，導致畜產(chǎn)品自身攜帶大量病原體，從而有可能通過食物鏈進一步威脅人類健康

2、。因此深入了解病毒感染宿主后，機體先天性免疫因子抗病毒作用的信號轉(zhuǎn)導機制，以便采用外源調(diào)控措施改善鴿的自身免疫狀況，降低其受PPMV-1等病原感染、傳播病原機率以及保護鴿群具有較為重要的意義。
　　本試驗采用50只1月齡健康鴿，隨機分為攻毒組40只和對照組10只。攻毒組采用滴鼻點眼的方式接種PPMV-1（pi/CH/LHLJ/110822毒株），對照組接種PBS，在攻毒當天將對照組鴿子處死，采取肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腺胃、法氏囊

3、、盲扁、氣管、哈腺、腦等10個組織。攻毒組分別在攻毒后24 h、72 h和7d各取10只處死，采取與對照組相同的組織，剩余10只鴿子繼續(xù)飼養(yǎng)觀察臨床癥狀。從第8d起每隔4d檢測1次其血清抗體水平。應用實時熒光定量RT-PCR的方法檢測攻毒前后各組織器官中PPMV-1的病毒載量、Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)、RIG-Ⅰ樣受體(RIG-Ⅰ like receptors)、禽β-防御素(Avianβ-de

4、fensins，AvBDs)、細胞因子、凋亡基因及相關免疫因子表達量的變化。
　　臨床觀察發(fā)現(xiàn)，鴿子感染PPMV-1后主要表現(xiàn)為精神萎靡、食欲不振、流涎、無法站立，并且發(fā)生此癥狀1-2 d就會引起鴿子的死亡（分別在感染該病毒的第18、19、27 d各死亡一只）。將死亡鴿子進行剖檢發(fā)現(xiàn)，在氣管中有干酪樣物質(zhì);而病理切片分析結(jié)果顯示，檢測組織均有不同程度的組織病變，且均有淤血產(chǎn)生。血清抗體水平的檢測結(jié)果顯示，機體從第8d開始產(chǎn)生特異性

5、抗體，并且隨著時間的增加抗體水平有所增加。
　　定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示:在對照組各組織中均未檢測到病毒，攻毒組各組織中，在感染后24 h、72 h和7d均檢測到病毒存在。與對照組相比，PPMV-1病毒感染后，TLR2在肝臟(72 h)中表達量顯著上調(diào)(P＜0.05);TLR5在腎臟中的表達量顯著下調(diào)(P＜0.05);TLR7在氣管中（24h和72 h）表達量顯著上升(P＜0.05);TLR15主要在攻毒后的組織中產(chǎn)生，且在腺

6、胃和脾臟中的表達量顯著提高(P＜0.05)。RIG-Ⅰ基因在體內(nèi)分布廣泛，且在感染后72 h的肝臟中表達量上升明顯(P＞0.05)。對于鴿AvBDs的檢測發(fā)現(xiàn)，AvBD1和AvBD7在攻毒前后的組織中均未被檢測到;AvBD2主要在肺臟、腎臟、脾臟、法氏囊和對照組的盲扁中檢測到，AvBD10主要在腦、腎臟和對照組的氣管中檢測到，但兩者在各組織中的差異均不顯著(P＞0.05)。同時發(fā)現(xiàn)，經(jīng)PPMV-1病毒感染后，白介素6(Interleuk

7、in6，IL-6)在72 h、7d的肝臟和72 h的氣管中表達量顯著升高(P＜0.05);IL-8在腎臟中的表達量顯著下降(P＜0.05);IL-10在72 h的肝臟中表達量顯著升高(P＜0.05)。PPMV-1病毒刺激了干擾素γ(Interferonγ，IFN-γ)在脾臟（24 h和72 h）、腎臟（72 h和7d）和盲扁（72 h和7d)中產(chǎn)生且差異顯著(P＜0.05);RNA依賴性蛋白激酶(RNA-dependent protei

8、n kinase，PKR)在攻毒72 h后肝臟中表達量顯著上調(diào)(P＜0.05);2'-5'寡腺苷酸合成酶(2'-5' oligoadenylatesynthetase，OAS)在攻毒后72 h的氣管中的表達量顯著下調(diào)(P＜0.05)。感染PPMV-1后，凋亡基因FAS配體(FASLG)在肝臟中上升明顯，且差異顯著(P＜0.05);B細胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2）在攻毒后24 h和

9、72 h的肝臟中表達量上升，但差異不顯著（P＞0.05）;而Bcl-2相關蛋X白(Bcl-2 Aaaociated X Protein，Bax)在肝臟中的表達量顯著下降(P＜0.05);Caspase-6主要在攻毒后的部分組織中表達。
　　綜上所述，PPMV-1病毒可誘導機體產(chǎn)生相應HI抗體，并且隨著時間的增加抗體水平有所增加。經(jīng)PPMV-1誘導后，TLRs(2，7和15)在部分組織中的表達量顯著上調(diào)(P＜0.05)，而TLR5的

10、表達量顯著下調(diào)（P＜0.05）;促炎因子IL-6和抗炎因子IL-10在肝臟中表達量顯著升高(P＜0.05)。IFN-γ可被PPMV-1誘導表達，并且由IFN-γ誘導合成的PKR在感染后72 h肝臟中表達量顯著上升(P＜0.05);而IL-8、OAS和促凋亡因子Bax表達量顯著下調(diào)(P＜0.05);FASLG在肝臟中表達量顯著上調(diào)(P＜0.05);凋亡基因Caspase-6在脾臟和盲扁中被PPMV-1病毒誘導表達且在盲扁和脾臟中上調(diào)顯著(