副粘病毒入侵宿主細(xì)胞的機(jī)制研究.pdf

1、囊膜病毒與宿主細(xì)胞的膜融合是病毒入侵宿主細(xì)胞的第一步,這一過(guò)程涉及到病毒囊膜表面蛋白質(zhì)與宿主細(xì)胞表面受體蛋白質(zhì)(或唾液酸)之間的相互作用和構(gòu)象變化.該論文研究了仙臺(tái)病毒和禽副粘病毒-2這兩種副粘病毒入侵宿主細(xì)胞過(guò)程中病毒囊膜表面相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用.副粘病毒囊膜中與融合功能有關(guān)的糖蛋白有兩種,即血凝素神經(jīng)氨酸酶(HN)和融合糖蛋白(F),其中F蛋白有兩段七肽重復(fù)區(qū)域(heptad repeat, HR),分別稱(chēng)為七肽重復(fù)區(qū)域1(HR1)

2、與七肽重復(fù)區(qū)域2(HR2).人免疫缺陷病毒(HIV)的研究已經(jīng)證明,這兩段多肽(HR1、HR2)相互結(jié)合形成六螺旋束(或稱(chēng)發(fā)夾三聚體)結(jié)構(gòu)從而引發(fā)膜融合.該研究通過(guò)體外表達(dá)HR多肽和體外實(shí)驗(yàn),經(jīng)分子篩及圓二色譜實(shí)驗(yàn)證明,仙臺(tái)病毒F蛋白的七肽重復(fù)區(qū)(HR1-linker-HR2)可形成穩(wěn)定的六螺旋束結(jié)構(gòu),熱變性溫度為95℃,首次獲得了該聚合體的蛋白結(jié)晶,該晶體在pH2.5、0.1M檸檬酸環(huán)境下生成,X-光衍射解析結(jié)果確證其形成的結(jié)構(gòu)是典型

3、的六螺旋束(發(fā)夾三聚體)結(jié)構(gòu).采用病毒合胞體形成抑制實(shí)驗(yàn)研究首次證明,體外表達(dá)的禽副粘病毒-2 HR2多肽能特異性地高效抑制病毒與宿主細(xì)胞膜的融合,且與禽副粘病毒-1(即新城疫病毒)沒(méi)有交叉抑制活性,而體外表達(dá)的禽副粘病毒-2 HR1則沒(méi)有這種抑制活性;用分子篩結(jié)合蛋白電泳及圓二色譜實(shí)驗(yàn)首次證明,禽副粘病毒-2的HR1和HR2可相互結(jié)合形成穩(wěn)定的六螺旋束結(jié)構(gòu),其熱變性溫度大于90℃.采用ExPASy與DNAstar蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)系列軟件