版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、分泌表達(dá)人血管抑素K(1-3)、內(nèi)皮抑素的基因工程細(xì)胞的構(gòu)建目的:利用分子生物學(xué)和細(xì)胞學(xué)技術(shù)構(gòu)建篩選出兩種分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人血管抑素K(1-3)、內(nèi)皮抑素基因并能分泌表達(dá)人血管抑素K(1-3)、內(nèi)皮抑素蛋白的重組C2C12細(xì)胞,為利用移植微囊化基因工程細(xì)胞技術(shù)將人血管抑素K(1-3)、內(nèi)皮抑素基因?qū)塍w內(nèi),進(jìn)行腫瘤治療研究奠定基礎(chǔ)。 方法:根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的序列設(shè)計(jì)引物,利用RT-PCR從人胎肝細(xì)胞提取的RNA中擴(kuò)增人血管抑素K(1-3
2、)、內(nèi)皮抑素基因,利用重疊延伸PCR技術(shù)將人白細(xì)胞介素-2信號(hào)肽的DNA編碼序列融合到內(nèi)皮抑素基因的5'端,T-A克隆到pGEM-T載體中,測(cè)序正確后定向亞克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3中,構(gòu)建出真核表達(dá)載體pcDNA3-ASK(1-3)、pcDNA3-SS-ES。利用脂質(zhì)體將測(cè)序的重組載體轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞,利用G418篩選,進(jìn)行單克隆培養(yǎng)。從獲得的單克隆利用RT-PCR和westernblot篩選出分泌表達(dá)目的蛋白的重組細(xì)胞克隆。
3、 結(jié)果:利用RT-PCR從人胎肝細(xì)胞RNA得到的人血管抑素K(1-3)、內(nèi)皮抑素基因在10g/L的瓊脂糖凝膠電泳上分別顯示為約1100bp和550bp的條帶,與預(yù)期大小一致。測(cè)序結(jié)果中,血管抑素(K1-3)基因中有兩處堿基突變,但均屬于同義突變。內(nèi)皮抑素基因序列與GENEBANK中提供的序列一致且其5'端與人白細(xì)胞介素-2信號(hào)肽DNA編碼序列成功融合。將pcDNA3-ASK(1-3)、pcDNA3-SS-ES轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞后利
4、用1000μg/ml的G418篩選后有抗性細(xì)胞單克隆形成。各挑選八單克隆提取RNA利用RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各有兩個(gè)克隆有目的基因轉(zhuǎn)錄。RT-PCR檢測(cè)出有人血管抑素(K1-3)、內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)錄的重組C2C12細(xì)胞克隆的培養(yǎng)基上清westernblot檢測(cè)分別可見46kD、20kD的特異蛋白條帶,與文獻(xiàn)報(bào)道一致。結(jié)論:成功利用RT-PCR技術(shù)人胎肝細(xì)胞RNA中克隆了人血管抑素K(1-3)、內(nèi)皮抑素基因;成功利用重疊延伸PCR技術(shù)在內(nèi)皮抑
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 持續(xù)釋放內(nèi)皮抑素及γ-干擾素的微囊化基因工程細(xì)胞的抗腫瘤研究.pdf
- 內(nèi)皮抑素基因的獲取及其分泌型質(zhì)粒構(gòu)建的研究.pdf
- 鼠內(nèi)皮抑素基因的克隆及表達(dá).pdf
- 人血管抑素AK(1-3)基因的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá).pdf
- 心肌梗死大鼠內(nèi)皮抑素、血管抑素的表達(dá)及其機(jī)制和干預(yù)研究.pdf
- 高效分泌表達(dá)內(nèi)皮抑素的腺病毒載體研究.pdf
- 內(nèi)皮抑素真核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建與其抗血管生成及抑瘤效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 血管抑素下調(diào)人舌鱗癌細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá).pdf
- 消痰散結(jié)方對(duì)裸鼠原位移植人胃癌組織內(nèi)皮抑素和血管抑素表達(dá)的影響.pdf
- 人非小細(xì)胞肺癌中內(nèi)皮抑素的表達(dá)研究.pdf
- 利用人內(nèi)皮抑素基因構(gòu)建植物表達(dá)載體及對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf
- 慢病毒載體介導(dǎo)內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細(xì)胞抑制視網(wǎng)膜新生血管的研究.pdf
- 人血管抑素(K1-3)在家蠶細(xì)胞和幼蟲中的表達(dá)及其生物活性研究.pdf
- 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體在膠原性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型中的表達(dá)及內(nèi)皮抑素和血管抑素對(duì)其表達(dá)的干預(yù).pdf
- 人內(nèi)皮抑素基因的克隆、重組表達(dá)、純化和活性研究.pdf
- 內(nèi)皮抑素抑制脈絡(luò)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 胰島素經(jīng)PI3K-GSK3β信號(hào)通路調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮素-1基因表達(dá).pdf
- 人內(nèi)皮抑素小環(huán)載體的構(gòu)建及其功能研究.pdf
- 血管內(nèi)皮抑素對(duì)lewis肺癌細(xì)胞直接效應(yīng)的觀察.pdf
- 血管抑素基因克隆及在e.colidh5α的表達(dá)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論