電離輻射引起骨髓微環(huán)境中趨化因子CCL3及CXCL14濃度改變機制.pdf

1、電離輻射會引起機體基因的改變從而引發(fā)一系列病理生理變化,因此從這一變化的機制角度加以分析可以為輻射防護研究以及輻射相關的藥物開發(fā)提供參考。在對前期基因芯片結果進行進一步分析后,我們得到了在輻照導致的骨髓損傷的修復階段,免疫反應(主要是造血作用)發(fā)揮了關鍵性功能;主要參與造血干細胞的自我更新、增殖及分化,加速機體恢復。因此,我們選擇參與免疫反應(包括造血作用)的分泌性趨化因子CCL3和CXCL14進行蛋白水平的初步分析。并且構建假說:在輻

2、射損傷修復階段,機體通過自發(fā)下調(diào) CCL3表達以及增加CCL3的水解作用促進干細胞的增殖,同時上調(diào)CXCL14的表達促進機體修復。
　　首先,構建半致死劑量輻照損傷動物模型,通過外周血細胞及骨髓有核細胞計數(shù)以及骨髓細胞涂片觀察在損傷修復階段血細胞的改變及恢復情況。其次,通過ELISA試劑盒對輻照損傷動物模型骨髓微環(huán)境中CCL3和CXCL14蛋白表達水平進行檢測,并對骨髓細胞分泌的能夠水解CCL3的蛋白水解酶CtsG蛋白含量通過We

3、stern Blot方法進行檢測,分析目標蛋白在輻照損傷修復階段的濃度的變化趨勢以及對于引起這一濃度改變的機制進行探討。
　　結果顯示骨髓損傷修復階段骨髓有核細胞的恢復先于外周血白細胞及血小板的恢復,紅細胞受輻照刺激影響較小;骨髓細胞涂片結果進一步證實了輻照引起了骨髓細胞的嚴重損傷,其中電離輻射對成熟紅細胞的損傷作用最小;蛋白檢測結果中骨髓損傷修復過程中微環(huán)境中趨化因子CCL3顯著降低,CXCL14保持不變;水解CCL3的蛋白水解

4、酶CtsG在細胞中濃度升高。該結果進一步證明CCL3在輻照損傷修復階段發(fā)揮主要作用,機體通過自發(fā)下調(diào) CCL3及加速其蛋白水解兩方面減少CCL3對造血干細胞的增殖抑制。而CXCL14蛋白變化趨勢與mRNA不符可能與輻射急性期泛素化水平升高有關,結果說明CXCL14與輻照損傷后機體恢復無關,然而卻可能與電離輻射初期泛素化水平顯著升高及電離輻射引起的致癌性有關。
　　綜上,我們對前期基因芯片結果進行進一步研究,證明 CCL3是機體損傷