人單核細(xì)胞（THP-1）cDNA表達(dá)文庫的構(gòu)建及趨化因子CXCL14（MIP-2γ-BRAK）受體的尋找.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　趨化因子MIP-2γ是一個(gè)屬于CXC家族的新型趨化因子，趨化因子受體屬于七次跨膜的G蛋白耦聯(lián)受體(GPCR)超家族，而GPCR是當(dāng)前臨床用藥最主要的靶點(diǎn)，所以，本研究想通過不同的策略和技術(shù)路線來克隆CXCL14的受體。為了克隆CXCL14的受體，我們首先嘗試了GSTpull-down的方法，然后嘗試了免疫共沉淀方法，隨后又采用了已發(fā)現(xiàn)的趨化因子受體在克隆時(shí)較為常用的一種策略，即通過家族成員在核酸序列上的相似性，用簡并寡核苷酸探針從文

2、庫中釣取或用簡并引物PCR擴(kuò)增來得到新的基因序列然后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所得到的新序列是否是所要尋找的受體序列。接下來又采用了已發(fā)現(xiàn)的趨化因子受體在克隆時(shí)最為常用的一種策略——孤兒受體克隆策略(orphanreceptorcloningstrategy)，這些方法均告失敗后，最后我們選用了表達(dá)克隆(ExpressionCloning)這一策略，構(gòu)建了CXCL14靶細(xì)胞人單核細(xì)胞系THP-1的cDNA表達(dá)文庫，通過一系列的鑒定表明該cDNA文庫

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