活化TLR2誘導單核細胞性白血病THP-1細胞的凋亡和分化.pdf

1、目的:白血病是造血干細胞惡性轉化引起的疾病，其特點之一是細胞分化被阻滯在幼稚階段，不能產生成熟的功能白細胞，從而導致貧血、出血、感染等一系列臨床表現(xiàn)。因而，誘導白血病細胞分化和促進其凋亡成為白血病治療的新方向。Toll樣受體在機體抗微生物感染中發(fā)揮著重要作用，其功能為識別微生物的組成分子，誘導抗微生物非特異性的天然免疫應答及炎癥反應。樹突狀細胞表面表達的Toll樣受體識別微生物組成分子后，促使其分化成熟同時啟動抗原特異性的獲得性免疫應答

2、。TLR2能識別多種微生物細胞的組成分子，如細菌脂蛋白、脂磷壁酸、脂多糖(LPS)。細菌脂蛋白通過活化TLR2能誘導THP-1的凋亡，本實驗的目的是探討TLR2的另一配體PGN(肽聚葡糖)誘導單核細胞性白血病THP-1凋亡與分化的可能性，為臨床治療白血病提供新的思路。 方法: (1)RT-PCR檢測基因的表達。(2)流式細胞術檢測蛋白質的表達。(3)ELISA檢測蛋白質的分泌情況。(4)PI-Annexin V染色檢測凋亡水平。

3、(5)抗體中和實驗檢測細胞因子與THP-1凋亡的相關性。(6)Western Blotting檢測細胞內信號傳導分子的活化。(7)細胞粘附實驗檢測PGN對細胞粘附的影響。 結果:RT-PCR分析顯示THP-1細胞表達除TLR3以外所有的TLRs，流式細胞術檢測到THP-1細胞表面表達CD14、TLR2、TLR4蛋白，TLR2配體PGN能上調CD14、TLR2的表達。同時PGN能誘導 THP-1 細胞表達細胞因子 IL-1α、IL

4、-8、TNFα的上調，并能活化TLR2傳導通路中的P38、ERK以及 NF-κB，說明 THP-1表達功能性的TLR2受體。PI-Annexin V 染色顯示PGN能誘導THP-1細胞的凋亡，并呈時間和劑量依賴性關系。PGN 所誘導的凋亡與自分泌TNFα密切相關，因為PGN能顯著上調TNFα的表達，而且TNFα中和抗體能抑制PGN所誘導的凋亡。分析PGN對 THP-1 表達凋亡抑制蛋白的影響，結果顯示PGN所誘導的表達改變與TNFα所誘