活化TLR4誘導(dǎo)單核細胞性白血病THP-1細胞凋亡機制的研究.pdf

1、目的：Toll 樣受體(TLR)是參與非特異性免疫的一類重要分子，也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁。新近研究發(fā)現(xiàn)，許多微生物組分的抗癌免疫療效是通過TLR信號通路介導(dǎo)的。本實驗通過活化TLR4誘導(dǎo)單核細胞性白血病 THP-1細胞發(fā)生凋亡，并以此為切入點研究活化TLR4誘導(dǎo)細胞凋亡的分子機制，為選擇TLR作為靶點治療單核細胞性白血病提供理論依據(jù)。 方法： (1)RT-PCR檢測基因的表達。(2)流式細胞術(shù)檢測蛋白質(zhì)的表達。(

2、3)ELISA檢測分泌蛋白的表達。(4)PI-Annexin V染色檢測凋亡水平。(5)抗體中和實驗驗證細胞因子與 THP-1細胞凋亡的相關(guān)性。(6)Western Blot檢測細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)分子的活化。 結(jié)果： RT-PCR結(jié)果顯示 THP-1細胞表達除TLR3以外所有的TLRs，進一步流式細胞術(shù)分析證實 THP-1細胞表面表達CD14、TLR2、TLR4蛋白，TLR4的配體12S刺激后，CD14、TLR2、TLR4的表達上調(diào)

3、，同時LPS也能活化TLR4信號傳導(dǎo)通路包括ERK、JNK、P38和NF-kB，說明THP-1細胞表達功能性TLR4。PI-Annexin V染色分析發(fā)現(xiàn)LPS活化TLR4誘導(dǎo)THP-1細胞的凋亡，并呈劑量依耐性和時間依耐性。LPS所誘導(dǎo)的細胞凋亡與上調(diào)凋亡相關(guān)細胞因子TNF α和TRAIL有關(guān)，TNFα、TRAIL中和抗體阻斷因子的作用后，凋亡水平有一定的下降。另外，LPS還下調(diào)了Bcl-2的表達，同時上調(diào)BAK的表達。Western

4、 Blot分析也發(fā)現(xiàn)LPS不僅誘導(dǎo)了Caspase 8的活化，同時也誘導(dǎo)了Caspase9的活化。因此，TLR4不僅通過受體凋亡途徑同時通過線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)細胞的凋亡。此外，LPS活化TLR4還下調(diào)了Caspase 8抑制蛋白FLIPL的表達，從而更有利于凋亡的發(fā)生。 結(jié)論：LPS通過活化TLR4誘導(dǎo) THP-1細胞發(fā)生凋亡，此凋亡過程既有死亡受體介導(dǎo)的細胞凋亡信號通路參與又有線粒體介導(dǎo)的細胞凋亡信號通路參與。LPS活化TLR