Survivin在柔紅霉素誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡機(jī)制中的研究.pdf

1、目的 通過檢測(cè)不同化療藥物作用后survivin及caspase-3，8，9的變化，探討survivin在DNR誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡機(jī)制中的作用。 方法 不同濃度的柔紅霉素(DNR)和長(zhǎng)春新堿(VCR)(0.1mg/L、1mg/L、10mg/L)分別作用于Molt-4細(xì)胞，在不同作用時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行：(1)MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率；(2)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析細(xì)胞凋亡率；(3)逆轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)

2、survivinmRNA含量的變化；(4)免疫組化法檢測(cè)survivin蛋白表達(dá)的變化；(5)免疫印跡(Westernblot)檢測(cè)caspase-3，8，9蛋白表達(dá)變化。 同時(shí)，免疫組化法檢測(cè)62例急性白血病患兒survivin蛋白表達(dá)、定位，分析survivin與P53的相關(guān)性，以及survivin與化療藥物敏感性的關(guān)系。 結(jié)果 第一部分： (1)MTT結(jié)果顯示隨著藥物劑量加大和作用時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖

3、抑制率降低，呈時(shí)間和劑量依賴性，且DNR作用較VCR明顯(P＜0.05)。 (2)FCM分析顯示在相同藥物劑量和相同時(shí)間，DNR組較VCR組Molt-4細(xì)胞凋亡率明顯升高(P＜0.01)。 (3)RT-PCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在DNR組，隨劑量加大和作用時(shí)間延長(zhǎng)，survivinmRNA含量減低(P＜0.05)，而在VCR組沒有明顯變化(P＞0.05)。 (4)免疫組化法可見隨藥物劑量加大和作用時(shí)間延長(zhǎng)，DNR組surv

4、ivin蛋白表達(dá)減低(P＜0.01)，呈現(xiàn)從胞漿向胞核轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，而在VCR組無明顯變化(P＞0.05)。 (5)Westernblot法觀察到DNR組Molt-4細(xì)胞可檢測(cè)到caspase-3酶原及活化片斷的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)到caspase-9酶原剪切活化片斷的表達(dá)，呈時(shí)間和劑量依賴性(P＜0.05)，但無明顯的caspase-8活化片斷的表達(dá)。 第二部分： (1)Survivin在急性白血病細(xì)胞中的表達(dá)較正常細(xì)

5、胞高(P＜0.05)。 (2)急性白血病患兒survivin的表達(dá)與P53呈明顯正相關(guān)(P＜0.01)。 (3)Survivin胞核表達(dá)的急性白血病患兒比胞漿表達(dá)者臨床完全緩解率高(P＜0.05)。 結(jié)論 (1)DNR通過線粒體途徑誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡。 (2)Survivin/P53在DNR誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，而與VCR誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡無明顯關(guān)系。 (3)Survivn在兒童急性白