柔紅霉素對Jurkat細胞株促凋亡作用及其作用機制的研究.pdf

1、目的：探討柔紅霉素(DNR)致急性淋巴細胞白血病Jurkat細胞株凋亡的作用因素，研究活性氧(ROS)在凋亡過程中的作用。 方法：①體外培養(yǎng)Jurkat細胞株，加入DNR使終濃度分別為0.05，0.1，0.5，1ug/ml，觀察細胞生長情況；②MTT方法檢測DNR作用12、24、48h對Jurkat細胞株增殖的影響；③流式細胞儀檢測DNR作用下細胞內ROS濃度及細胞株凋亡比例；④Hoechst/PI染色后熒光顯微鏡觀察DNR作用

2、下細胞株凋亡；⑤RT-PCR檢測DNR作用下bax、survivin、bcl-2和bcl-xl基因mRNA的表達；⑥觀察抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine，NAC)作用前后細胞內ROS濃度、細胞凋亡及凋亡相關基因變化。 結果：⑴DNR可明顯抑制Jurkat細胞株的活性，MTT檢測0.05、0.1、0.5、1 ug/ml DNR作用24 h細胞抑制率分別為（22.00±3.04）％、（33.65±1.42）

3、％、（40.52±2.35）％、（66.25±2.27）％；⑵0、0.05、0.1、0.5、1 ug/ml的DNR分別作用于Jurkat細胞株24h后，活性氧分別為(7.98±0.55)％、(8.88±0.86)％、(9.46±0.98)％、(17.48±2.98)％、(24.46±2.43)％，Jurkat細胞株ROS含量變化與DNR濃度呈正相關；⑶0、0.05、0.1、0.5、1ug/ml的DNR分別作用于Jurkat細胞株24h后

4、，Hoechst/PI染色熒光顯微鏡下可見細胞株凋亡，在DNR濃度0～1 ug/ml之間，0.5 ug/ml時早期凋亡細胞較多，為（12.33±1.15）％，AnnexinV/PI雙染流式檢測Jurkat細胞凋亡率分別為(11.41±1.44)％、(34.96±3.32)％、(45.58±3.12)％、(84.19±2.65)％、(87.93±1.74)％；⑷0、0.05、0.1、0.5、1ug/ml的DNR 作用下，Jurkat細胞株

5、ROS含量與細胞凋亡率有明顯相關性（P＜0.05）,NAC預處理組與對照組(DNR濃度為0.5 ug/ml)比較，Jurkat細胞株早期凋亡率由(12.44±2.16)％降至(7.96±3.72)％（P＜0.05），但兩組比較細胞總凋亡率下降無明顯統(tǒng)計學差異；⑸抗氧化劑NAC作用下，促凋亡bax基因mRNA表達明顯下調，凋亡抑制基因survivin、bcl-2和bcl-xl的mRNA表達增高（P＜0.05）。 結論：①DNR能夠