感染人單核細(xì)胞THP-1前后鉤端螺旋體外膜蛋白抗原表達(dá)差異性.pdf

1、目的：了解感染人單核細(xì)胞THP_1前后問號鉤端螺旋體(簡稱鉤體)外膜蛋白表達(dá)變化，為選擇鉤體基因工程疫苗侯選抗原提供依據(jù)。
　　 方法：采用TritonX-114法提取感染THP-1細(xì)胞前后問號鉤體黃疸出血群賴型賴株外膜蛋白。采用雙向電泳技術(shù)分離鉤體外膜蛋白，銀染色法檢測感染前后鉤體外膜蛋白表達(dá)差異。感染后4個表達(dá)顯著上調(diào)和4表達(dá)顯著下調(diào)的蛋白點(diǎn)進(jìn)行胰酶水解后，采用LC-MS/MS方法鑒定蛋白質(zhì)。應(yīng)用生物信息學(xué)軟件分析靶蛋白跨膜

2、區(qū)和信號肽，采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測感染細(xì)胞前后靶基因mRNA變化。采用Western blot檢測感染THP-1細(xì)胞前后外膜蛋白與相應(yīng)抗體反應(yīng)性強(qiáng)弱。
　　 結(jié)果：感染THP-1細(xì)胞60min后，鉤體外膜蛋白中Loa22、GroEL、FOF1ATP合成酶α和β亞單位表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)，F(xiàn)laB2、LigB、OmpA家族蛋白和OmpA表達(dá)顯著下降(P<0.05)，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測結(jié)果與之基本一