β腎上腺素能受體介導(dǎo)THP-1單核細(xì)胞趨化因子受體2表達(dá)及遷移的影響.pdf

1、目的:β腎上腺素能受體阻滯劑對(duì)慢性精神應(yīng)激所誘發(fā)的冠心病療效顯著,但機(jī)制不明。外周循環(huán)血液中淋巴細(xì)胞膜上含有高密度β2腎上腺能受體(β-AR),它是交感神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)免疫系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)節(jié)的分子基礎(chǔ)。單核-巨噬細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)冠心病不穩(wěn)定性斑塊內(nèi)有大量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),其膜上也含有高密度的β2-AR。慢性精神應(yīng)激時(shí)釋放的兒茶酚胺類激素是否與β-AR結(jié)合,由此調(diào)節(jié)單核-巨噬細(xì)胞功能和影響動(dòng)脈粥樣斑塊的性質(zhì),國(guó)內(nèi)

2、外未見類似研究。本項(xiàng)目以單核-巨噬細(xì)胞β-AR為研究對(duì)象,在細(xì)胞水平上,探討β-AR活性對(duì)人單核細(xì)胞(THP-1)趨化因子受體2(C Chemokine Receptor2,CCR2)表達(dá)及遷移的影響。
　　方法:(1)體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、異丙腎上腺素組(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)、美托洛爾組(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)

3、、普萘洛爾組(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)。(2),不通濃度的異丙腎上腺素與THP-1細(xì)胞作用1小時(shí)后,與50mg/Lox-LDL共孵育24小時(shí),采用Western blotting檢測(cè)THP-1細(xì)胞CCR2蛋白的表達(dá),Transwell小室檢測(cè)THP-1細(xì)胞的遷移能力。(3)50μmol/L的異丙腎上腺素與THP-1細(xì)胞預(yù)孵育1h和不同濃度的美托洛爾預(yù)孵育1h后,與50mg/Lox-LD

4、L共孵育24小時(shí),采用Western blotting檢測(cè)THP-1細(xì)胞CCR2蛋白的表達(dá),Transwell小室檢測(cè)THP-1細(xì)胞的遷移能力。(4)50μmol/L的異丙腎上腺素與THP-1細(xì)胞預(yù)孵育1h和不同濃度的普萘洛爾預(yù)孵育1h后,與50mg/Lox-LDL共孵育24小時(shí),采用Western blotting檢測(cè)THP-1細(xì)胞CCR2蛋白的表達(dá),Transwell小室檢測(cè)THP-1細(xì)胞的遷移能力。
　　結(jié)果:(1)不同濃度

5、的異丙腎上腺素作用THP-1細(xì)胞1h小時(shí),與50mg/Lox-LDL共孵育24小時(shí)后,結(jié)果顯示,1μmol/L、10μmol/L及50μmol/L異丙腎上腺素處理后,細(xì)胞CCR2蛋白水平明顯上調(diào)(P<0.05),細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)(P<0.05),并呈濃度依賴性;
　　(2)非選擇性β腎上腺素能受體阻滯劑普萘洛爾與受試細(xì)胞孵育24小時(shí)后能明顯阻滯異丙腎上腺素對(duì)CCR2蛋白表達(dá)以及細(xì)胞遷移能力的影響,呈劑量依賴性(P<0.05)。

6、而高濃度的美托洛爾(10μmol/L、50μmol/L)也能拮抗異丙腎上腺素的作用(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)通過(guò)β-AR介導(dǎo),異丙腎上腺素能夠上調(diào) ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞CCR2蛋白的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞的遷移。
　　(2)高濃度的美托洛爾和低濃度的普萘洛爾可以下調(diào)ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞CCR2蛋白的表達(dá),抑制細(xì)胞的遷移,這一作用可能與阻斷β2-AR有關(guān),為進(jìn)一步研究β2-AR新功能和抗AS機(jī)制奠定基