mPTP介導(dǎo)細(xì)胞凋亡在糖尿病家兔骨骼肌病變中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討線粒體通透性轉(zhuǎn)化孔(mitochondrial permeability transition pore，mPTP)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在糖尿病家兔骨骼肌病發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：36只家兔隨機(jī)分為對(duì)照組7只，實(shí)驗(yàn)組29只，實(shí)驗(yàn)組家兔給予鏈脲霉素（STZ）和四氧嘧啶（ALX）聯(lián)合耳緣靜脈注射制造糖尿病模型，造模成功后的糖尿病家兔再隨機(jī)分為1月組、3月組和6月組。分別于糖尿病1月、3月、6月時(shí)取各只家兔右側(cè)股四頭肌。以光鏡

2、和投射電鏡觀察骨骼肌形態(tài)改變，采用免疫組化方法檢測(cè)Bcl-2、Bax表達(dá)情況，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨骼肌細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位。
　　結(jié)果：⑴骨骼肌病理觀察：與對(duì)照組比較，糖尿病家兔1月組肌組織未見異常變化；糖尿病家兔3月組肌纖維排列稀疏，細(xì)胞形態(tài)改變，并有部分肌纖維肥大；糖尿病家兔6月組肌纖維排列更稀疏、紊亂，除了肌纖維肥大外，還有部分肌纖維萎縮，毛細(xì)血管壁明顯增厚，但未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。⑵骨骼肌超微結(jié)構(gòu)變化：對(duì)照組家兔骨骼肌肌絲結(jié)

3、構(gòu)排列整齊、緊密，Z線方向一致，線粒體膜、脊結(jié)構(gòu)均未見異常。糖尿病家兔1月組骨骼肌肌絲排列整齊有序，明暗帶清晰，線粒體腫脹，大量空泡出現(xiàn)。糖尿病家兔3月組，肌纖維萎縮明顯，肌絲排列紊亂，部分肌絲溶解，線粒體明顯腫脹、變性，脊走向紊亂、模糊，甚至溶解，少數(shù)脂質(zhì)沉著。糖尿病家兔6月組，線粒體變化程度同3月組，但肌絲溶解較3月組明顯加重，并出現(xiàn)細(xì)胞核溶解現(xiàn)象。⑶Bax，Bcl-2蛋白表達(dá)情況：對(duì)照組家兔骨骼肌幾乎未見Bax的陽(yáng)性信號(hào)，與對(duì)照組

4、比較，糖尿病家兔各組Bax表達(dá)增高（p<0.05），且隨著糖尿病時(shí)間的延長(zhǎng)，Bax表達(dá)增高越明顯；糖尿病家兔各組Bcl-2表達(dá)降低，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01），3月時(shí)呈最低狀態(tài)，6月時(shí)較3月稍增加。⑷骨骼肌凋亡情況：與正常對(duì)照組家兔比較，糖尿病家兔的凋亡率明顯增高（P＜0.01），且隨著糖尿病時(shí)期的延長(zhǎng)，凋亡率呈遞增趨勢(shì)，糖尿病家兔各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。⑸線粒體膜電位變化：糖尿病家兔各組線粒體膜電位均

5、較對(duì)照組降低（P＜0.01），且隨著糖尿病時(shí)期的延長(zhǎng)，線粒體膜電位降低明顯，糖尿病家兔各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：①糖尿病骨骼肌形態(tài)學(xué)改變主要表現(xiàn)：骨骼肌細(xì)胞形態(tài)改變，肌纖維排列稀疏，并有部分肌纖維萎縮、肥大，線粒體腫脹、變性，線粒體脊走向紊亂、模糊，甚至溶解，少數(shù)脂質(zhì)沉著，細(xì)胞核溶解。②糖尿病時(shí)，骨骼肌細(xì)胞凋亡途徑被激活。③Bax/Bcl-2可能為糖尿病下 mPTP開放的重要分子基礎(chǔ)。④糖尿病時(shí)，誘導(dǎo)m