甘草黃酮及皂苷類成分譜效關(guān)系研究.pdf

1、目的：采用大孔吸附樹脂聯(lián)合聚酰胺柱層析技術(shù)富集甘草黃酮及皂苷類成分，并結(jié)合HPLC法建立不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分指紋圖譜，利用灰色關(guān)聯(lián)分析法對甘草黃酮及皂苷類成分進(jìn)行譜效關(guān)系研究，確定甘草黃酮各色譜峰代表的化學(xué)成分信息與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)程度及甘草皂苷各色譜峰代表的化學(xué)信息與鎮(zhèn)咳、保肝作用的關(guān)聯(lián)程度，最終確定可能與藥效相關(guān)的有效成分，為甘草藥材質(zhì)量控制提升提供規(guī)律性的科學(xué)依據(jù)，也為其廣泛栽培及種植提供一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法：<

2、br>　　1.通過大孔吸附樹脂聯(lián)合聚酰胺柱層析技術(shù)分別對新疆、內(nèi)蒙等十個(gè)不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分進(jìn)行富集，得到10個(gè)不同產(chǎn)地甘草藥材的黃酮、皂苷類成分富集部位。
　　2.HPLC/DAD法建立10個(gè)不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分指紋圖譜，運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似性評價(jià)系統(tǒng)軟件”進(jìn)行甘草黃酮及皂苷類成分指紋圖譜相似度評價(jià)。
　　3.富集部位藥效學(xué)研究：(1)采用氨水引咳法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，通過記錄咳嗽潛伏期和2 min內(nèi)咳嗽次

3、數(shù)來評價(jià)甘草黃酮及皂苷類成分的鎮(zhèn)咳作用；(2)采用四氯化碳致小鼠肝損傷實(shí)驗(yàn)，測定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的酶活力來綜合評價(jià)甘草皂苷類成分的保肝作用。
　　4.運(yùn)用灰色關(guān)聯(lián)分析法研究甘草黃酮及皂苷類成分的指紋圖譜特征峰所代表的化學(xué)成分信息與鎮(zhèn)咳及保肝藥效的關(guān)系，最終根據(jù)關(guān)聯(lián)度大小來確定指紋圖譜特征峰所代表的化學(xué)成分對其藥效作用的貢獻(xiàn)程度。
　　結(jié)果：
　　1.10個(gè)不同產(chǎn)地的甘草藥

4、材經(jīng)AB-8大孔吸附樹脂及聚酰胺柱層析技術(shù)富集后得到甘草黃酮類成分浸膏，它們分別為寧夏固原市原州區(qū)7.20 g、新疆11.60 g、寧夏吳忠市紅寺堡區(qū)8.40 g、甘肅8.20 g、寧夏鹽池縣發(fā)電站10.90 g、甘肅省慶陽市4.80 g、寧夏鹽池縣藥材基地7.00 g、陜西綏德縣12.00 g、內(nèi)蒙8.20 g、寧夏石嘴山市6.80 g；浸膏得率分別是3.60％、5.80%、4.20%、4.10%、5.45%、2.40%、3.50%、

5、6.60%、4.10%、3.40%；10個(gè)不同產(chǎn)地的甘草藥材經(jīng)D101大孔吸附樹脂富集得到甘草皂苷類成分浸膏，它們分別為寧夏吳忠市紅寺堡區(qū)7.50 g、陜西綏德縣8.80 g、寧夏隆德縣7.50 g、新疆6.20 g、甘肅省慶陽市6.80 g、內(nèi)蒙7.20 g、寧夏石嘴山市5.00 g、寧夏固原市原州區(qū)6.80 g、寧夏鹽池縣6.30 g、寧夏市售（具體產(chǎn)地不詳）5.40 g；浸膏得率分別是15.00%、17.60%、15.00%、12

6、.40%、13.60%、14.40%、10.00%、13.60%、12.60%、10.80%。
　　2.建立了10個(gè)不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分的指紋圖譜，通過“中藥色譜指紋圖譜相似性評價(jià)系統(tǒng)軟件”對甘草黃酮及皂苷類成分指紋圖譜進(jìn)行相似度評價(jià)，確定了甘草黃酮指紋圖譜中的11個(gè)共有峰，其保留時(shí)間在11.550 min的是芹糖甘草苷；保留時(shí)間在12.919 min的是甘草苷；保留時(shí)間在34.837 min的是芹糖異甘草苷；保留時(shí)間在4

7、4.512 min的是甘草素；保留時(shí)間在80.844 min的是異甘草素；確定了甘草皂苷指紋圖譜中的13個(gè)共有峰，其保留時(shí)間在37.355 min的是甘草酸；保留時(shí)間在74.370 min的是甘草次酸。
　　3.氨水引咳實(shí)驗(yàn)中，與空白組比較，陽性對照組、10個(gè)不同產(chǎn)地甘草黃酮及甘草類成分均能明顯延長小鼠咳嗽潛伏期、降低2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)(P<0.05,P<0.01)，表明甘草黃酮及皂苷類成分對氨水引起的咳嗽有一定的抑制作用；小鼠

8、致肝損傷實(shí)驗(yàn)中，與模型組比較，陽性對照組及10個(gè)不同產(chǎn)地甘草皂苷類成分均能降低四氯化碳致肝損傷的引起的AST、ALT升高(P<0.05，P<0.01)，說明甘草皂苷類成分對四氯化碳致小鼠肝損傷具有一定的保護(hù)作用。
　　4.采用灰色關(guān)聯(lián)分析法對指紋圖譜及藥效學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，結(jié)果如下：(1)甘草黃酮指紋圖譜中有10個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)度大于0.6，其中有5個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)度大于0.8，且關(guān)聯(lián)度大于0.8的物質(zhì)的順序?yàn)楸?/p>

9、留時(shí)間為36.823 min的物質(zhì)>保留時(shí)間為41.845 min的物質(zhì)>芹糖異甘草苷>保留時(shí)間為24.266 min的物質(zhì)>甘草苷；(2)甘草皂苷指紋圖譜中有12個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)度大于0.6，其中有2個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)度大于0.8，且關(guān)聯(lián)度大于0.8的物質(zhì)的順序?yàn)楦什菟?保留時(shí)間為38.102 min的物質(zhì)；(3)甘草皂苷指紋圖譜中有12個(gè)特征峰與血清中AST酶活力作用的關(guān)聯(lián)度大于0.6，其中有3個(gè)特征峰與血清中AST酶

10、活力作用的關(guān)聯(lián)度大于0.8，且關(guān)聯(lián)度大于0.8的物質(zhì)的順序?yàn)楸Ａ魰r(shí)間為38.102 min的物質(zhì)>保留時(shí)間為72.643 min的物質(zhì)>保留時(shí)間為11.935 min的物質(zhì)；有11個(gè)特征峰與血清中ALT酶活力作用的關(guān)聯(lián)度大于0.6，有4個(gè)特征峰與血清中ALT酶活力作用的關(guān)聯(lián)度大于0.8，且關(guān)聯(lián)度大于0.8的物質(zhì)的順序?yàn)楸Ａ魰r(shí)間為38.102 min的物質(zhì)>保留時(shí)間為72.643 min的物質(zhì)>保留時(shí)間為11.935 min的物質(zhì)>甘草酸

11、。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)通過AB-8、D101大孔吸附樹脂及聚酰胺柱層析技術(shù)有效地對甘草黃酮及皂苷類成分進(jìn)行富集，該方法簡便易行，結(jié)果可靠。
　　2.采用HPLC法對10個(gè)不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分進(jìn)行指紋圖譜測定，甘草黃酮指紋圖譜中有11個(gè)共有特征峰，甘草皂苷指紋圖譜中有13個(gè)共有特征峰，經(jīng)過考察，該方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較好，為甘草藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了參考。
　　3.藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出不同產(chǎn)

12、地甘草黃酮類成分具有不同程度的鎮(zhèn)咳作用；甘草皂苷類成分也有一定的鎮(zhèn)咳及保肝作用。
　　4.采用灰色關(guān)聯(lián)分析法對指紋圖譜及藥效學(xué)數(shù)據(jù)處理分析，結(jié)果如下：(1)甘草黃酮中有10個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用有關(guān)聯(lián)度，其中5個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用高度關(guān)聯(lián)；(2)甘草皂苷中有12個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用有關(guān)聯(lián)度，其中2個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用高度關(guān)聯(lián)；有12個(gè)特征峰與血清中AST酶活力有關(guān)聯(lián)度，其中3個(gè)特征峰與血清中AST酶活力高度關(guān)聯(lián)；有11個(gè)特征峰與血清中A L