不同伴生物質(zhì)對(duì)甘草皂苷類提取物的影響研究.pdf

1、目的:以研究甘草提取物中伴生物質(zhì)對(duì)甘草皂苷類成分物理化學(xué)性質(zhì)、藥代動(dòng)力學(xué)以及藥效學(xué)的影響，建立甘草指標(biāo)性成分、物理化學(xué)參數(shù)結(jié)合藥效的綜合評(píng)價(jià)方法；并探討三者之間的相關(guān)性，為科學(xué)、合理的剔除伴生物質(zhì)及中藥提取物的精制分離提供一定的依據(jù)。
　　方法1.采用膜分離、大孔樹脂吸附和水提醇沉技術(shù)制備含不同伴生物質(zhì)的甘草皂苷類提取物樣品并考察其指標(biāo)性成分含量及物理化學(xué)性質(zhì)。采用粘度計(jì)、濁度儀和粒徑儀等分別測(cè)定各樣品的粘度、濁度、粒徑和 Zet

2、a電位等；采用酶水解和考馬斯亮藍(lán)G-250比色法分別測(cè)定各樣品淀粉和蛋白質(zhì)的含量。2.伴生物質(zhì)對(duì)甘草皂苷類成分藥代動(dòng)力學(xué)的影響:應(yīng)用LC-MS/MS測(cè)定大鼠灌胃含不同伴生物質(zhì)的甘草皂苷提取物后血漿中甘草次酸的含量。3.伴生物質(zhì)對(duì)甘草皂苷類成分抗肝癌的藥效學(xué)影響研究：①采用CCK-8法檢測(cè)含不同伴生物質(zhì)的甘草皂苷類成分對(duì)人源肝癌細(xì)胞HepG2增殖的影響，采用PI染色法，運(yùn)用熒光顯微鏡對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)。②構(gòu)建小鼠肝癌模型，考察伴生物質(zhì)

3、對(duì)甘草皂苷類成分在H22荷瘤小鼠的抗腫瘤作用影響。
　　結(jié)果1.以指標(biāo)性成分和物理化學(xué)參數(shù)為綜合依據(jù)，從膜分離、醇沉和大孔樹脂吸附制備的14個(gè)樣品中篩選出原液、孔徑0.8μm的陶瓷膜（樣品0.8μm）、截留分子量為10k Da（樣品10k Da）、70％醇沉(樣品70%)和PHD600大孔吸附樹脂（樣品PHD600）共5個(gè)樣品，進(jìn)行生物活性的比較研究。2.給大鼠灌胃篩以上5個(gè)樣品（濃縮為含等量的甘草酸），與原液中甘草次酸（GA）藥

4、動(dòng)學(xué)參數(shù)相比較，樣品0.8μm中GA的Tmax和T1/2縮短；樣品10 k Da中GA的Cmax和AUC0-t顯著提高；樣品70%和PHD600純化中GA的Tmax和T1/2值減小，Cmax和AUC0-t的值顯著增大。3.①在含甘草酸0.2 mg/mL時(shí)，樣品70%和原液對(duì)HepG2的抑制率接近，而樣品0.8μm和10 k抑制率明顯增大，樣品70%的抑制率極高，可能存在某種成分毒死細(xì)胞。熒光顯微鏡下觀察到各樣品是通過誘導(dǎo)凋亡而作用，與原

5、液相比樣品0.8μm誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞的個(gè)數(shù)顯著增多（P<0.05），樣品10 k和PHD600無顯著差異。②與原液相比，樣品0.8μm和10k組的小鼠腫瘤質(zhì)量顯著減?。≒<0.05）。
　　結(jié)論:本文通過初步探索含伴生物質(zhì)對(duì)甘草皂苷類成分在物理化學(xué)參數(shù)、細(xì)胞水平和體內(nèi)過程等方面的差異。研究結(jié)果表明伴生物質(zhì)對(duì)甘草皂苷類成分生物活性有一定的影響，但是中藥治療疾病是從多途徑、多方位、多靶點(diǎn)發(fā)揮作用，其藥理作用也是多方面的。還需進(jìn)一步對(duì)伴生物