乙醇所致線粒體損傷與酒精性肝病機(jī)制的研究.pdf

1、目的：通過建立大鼠酒精性肝病模型，測(cè)定酒精性肝病發(fā)病過程中肝臟組織氧化抗氧化指標(biāo)，觀察肝細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)變化，研究乙醇對(duì)肝細(xì)胞線粒體滲透轉(zhuǎn)運(yùn)通道(permeabilitytransitionpore，PTP)、跨膜電位(ΔΨm)、胞內(nèi)鈣離子(Ca2+)水平等線粒體相關(guān)指標(biāo)的影響，來(lái)探討乙醇對(duì)肝細(xì)胞線粒體的影響及其機(jī)制，從一個(gè)新的角度對(duì)酒精性肝病的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行有益的研究，從而為酒精性肝病的臨床治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法

2、：成年雄性Wistar大鼠40只，體重(150±10)g，隨機(jī)分為兩組，對(duì)照組和模型組。酒精性肝病模型組20只，用酒精灌胃建立動(dòng)物模型；正常對(duì)照組20只，給予相同體積的生理鹽水代替酒精灌胃。光鏡下觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)變化；電鏡下觀察肝細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)變化；肝組織勻漿測(cè)定丙二醛(malondialdehyde，MDA)、總巰基及分型巰基的含量；提取肝臟線粒體進(jìn)行PTP開放狀況的檢測(cè)；分離純化肝細(xì)胞，分別用羅丹明123(Rhodamine12

3、3)、丫啶橙(Nonyl-AcridineOrange，NAO)、鈣熒光探針Fluo-3/AM標(biāo)記，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定線粒體跨膜電位、質(zhì)量以及肝細(xì)胞內(nèi)鈣離子([Ca2+]i)水平。 結(jié)果：光鏡下模型組肝臟呈現(xiàn)脂肪性變和/或炎性改變；電鏡下觀察到模型組大鼠肝細(xì)胞的線粒體明顯受損，出現(xiàn)膜斷裂，嵴斷裂或消失，可見巨大線粒體和U型線粒體；與對(duì)照組相比：(1)模型組肝臟MDA含量增加，巰基含量下降；(2)模型組大鼠肝臟線粒體PTP開放，導(dǎo)致線

4、粒體腫脹，540nm處吸收光度值A(chǔ)540減少(p＜0.01)；(3)模型組的線粒體跨膜電位ΔΨm顯著降低(p＜0.01)；(4)模型組線粒體質(zhì)量有明顯損害(p＜0.01)；(5)模型組的肝細(xì)胞[Ca2+]i顯著增加(p0.01)； 結(jié)論：長(zhǎng)期飲酒可引起肝細(xì)胞線粒體PTP開放，Ca2+外流，跨膜電位下降甚至崩潰，導(dǎo)致線粒體腫脹，引發(fā)肝細(xì)胞的凋亡或損傷。酒精誘導(dǎo)線粒體損傷途徑導(dǎo)致的肝細(xì)胞的凋亡和損傷可能是酒精性肝病重要的發(fā)病基礎(chǔ)和途