疏肝健脾、化痰活血方對(duì)非酒精性脂肪性肝病細(xì)胞模型線粒體損傷的干預(yù)作用.pdf

1、目的：成功建立NAFLD細(xì)胞模型，并觀察疏肝健脾、化痰活血方對(duì)NAFLD體外模型肝細(xì)胞凋亡、線粒體膜流動(dòng)性、膜電位水平、能量代謝、脂質(zhì)過氧化等的影響，探討其對(duì)NAFLD體外模型肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　 方法：將培養(yǎng)的幼鼠肝細(xì)胞分為正常組、造模組。正常組細(xì)胞用含20％FBS的DMEM-F12培養(yǎng)液；造模組在培養(yǎng)液中加入15μg/ml軟脂酸作用5天。進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)算肝細(xì)胞存活率，并用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞貼壁情況及形態(tài)改變

2、。模型成功后分為3組，即NAFLD細(xì)胞模型組(模型組)，水飛薊素治療組(對(duì)照組)和中藥血清治療組(中藥組)，并分別用水飛薊素，疏肝健脾、化痰活血方含藥血清干預(yù)，化學(xué)比色法檢測(cè)肝細(xì)胞活性、甘油三酯水平(TG)水平、肝細(xì)胞線粒體Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Cyto-0x活性，SOD、MDA、NO、GSH含量，流式細(xì)胞儀檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡率，Western Blot法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的表達(dá)，熒

3、光分光光度計(jì)檢測(cè)肝細(xì)胞線粒體膜流動(dòng)性、膜電位水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.對(duì)NAFLD體外模型細(xì)胞活性和TG的影響與正常組比，模型組細(xì)胞存活率明顯減少(P<0.05)，中藥組和水飛薊素組細(xì)胞存活率比模型組顯著升高(P<0.01)，與正常組比較無差異(P>0.05)。與正常組比，模型組TG含量明顯升高(P<0.01)，中藥組和水飛薊素組TG含量比模型組顯著降低(P<0.01)，中藥組TG含量與水飛薊素組比較有顯著差異(P

4、<0.05)。
　　 2.對(duì)NAFLD體外模型肝細(xì)胞凋亡的影響與正常組比，模型組凋亡率和ODA540值均明顯升高(P<0.01)。與模型組比，中藥組和水飛薊素組凋亡率和ODA540值均均明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01 or P<0.05)，中藥組凋亡率與水飛薊素組比較有顯著性差異(P<0.01)，中藥組ODA540值與水飛薊素組比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　 與正常組比，模型組Bcl-2蛋白表達(dá)水平明顯

5、降低(P<0.01)。與模型組比，中藥組Bcl-2蛋白表達(dá)水平升高，有顯著性差異(P<0.01)，中藥組與水飛薊素組比較有差異(P<0.05)。與正常組比，模型組Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)。與模型組比，中藥組和水飛薊素組均降低，有顯著性差異(P<0.01)，中藥組與水飛薊素組比較有顯著性差異(P<0.01)。
　　 3.對(duì)NAFLD體外模型肝細(xì)胞線粒體膜流動(dòng)性、膜電位水平的作用與正常組比，模型組膜

6、電位水平和膜流動(dòng)性均明顯降低(P<0.01)。與模型組比，中藥組和水飛薊素組膜電位水平和膜流動(dòng)性均升高，有顯著性差異(P<0.01 or P<0.05)，中藥組膜流動(dòng)性與水飛薊素組比較有差異(P<0.05)。但中藥組膜電位水平與水飛薊素組比較無差異(P>0.05)。
　　 4.對(duì)NAFLD體外模型肝細(xì)胞線粒體能量代謝的影響與正常組比，模型組Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶含量和Cyto-0x活性均明顯減少(P<0.01

7、)，中藥組Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶含量和Cyto-0x活性較模型組顯著升高(P<0.01)，但水飛薊素Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶含量與模型組比較無顯著性差異(P>0.05)。中藥組Ca2+-ATP酶含量較水飛薊素組有顯著性差異(P<0.01)，達(dá)到正常組水平(P>0.05)，Na+-K+-ATP酶和Cyto-0x活性與水飛薊素組比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　 5.對(duì)NAFLD體外模型肝

8、細(xì)胞線粒體脂質(zhì)過氧化的影響與正常組比，模型組細(xì)胞線粒體MDA含量明顯升高(P<0.01)，水飛薊素和中藥組MDA水平明顯低于模型組(P<0.01)，但水飛薊素和中藥組之間無顯著性差異(P>0.05)。SOD、NO和GSH含量，模型組較正常組均顯著降低(P<0.01)，中藥組能明顯升高SOD、NO和GSH含量，與模型組比有顯著性差異(P<0.01)。中藥組NO和GSH水平與水飛薊素組有差異(P<0.05)，水飛薊素組GSH水平與模型組比無

9、差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.肝郁脾虛、痰瘀交阻是NAFLD發(fā)病早期的基本病機(jī)；
　　 2.疏肝健脾、化痰活血方能有效降低NAFLD體外模型TG水平，提高損傷的細(xì)胞活性，減輕肝細(xì)胞損傷；
　　 3.疏肝健脾、化痰活血方能有效降低NAFLD體外模型肝細(xì)胞凋亡率，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)有關(guān)。
　　 4.疏肝健脾、化痰活血方能有效提高NAFLD體