酒精性肝病免疫機(jī)制探索.pdf

1、長(zhǎng)期飲酒導(dǎo)致酒精性肝病(ALD)，例如酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、肝纖維化、肝硬化，甚至肝癌等一系列事件的發(fā)生。酒精性肝病發(fā)生的病理機(jī)理十分復(fù)雜，包括乙醇及其有毒代謝產(chǎn)物對(duì)肝臟和腸道中各種細(xì)胞的作用、活性氧的產(chǎn)生和炎癥級(jí)聯(lián)應(yīng)答等。在其他因素，例如黃曲霉素、肥胖、肝炎病毒感染等共同作用下，酒精性肝病發(fā)展為肝癌的危險(xiǎn)性顯著增高。在酒精性肝病發(fā)生發(fā)展過程中，除代謝系統(tǒng)外，免疫系統(tǒng)也發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用。目前已有的研究報(bào)導(dǎo)酒精暴露通過LPS-TL

2、R4信號(hào)活化枯否細(xì)胞，釋放大量的促炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子以及ROS，造成肝臟損傷;進(jìn)而招募NKT細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，進(jìn)一步加重酒精性肝病的進(jìn)展;酒精暴露也會(huì)抑制NK/IFN-γ的抗纖維化作用，促進(jìn)肝臟纖維化的發(fā)生。但是在酒精性肝病向酒精性肝癌發(fā)生發(fā)展過程中，免疫系統(tǒng)是如何發(fā)揮作用？特別是免疫細(xì)胞的變化以及細(xì)胞間的相互作用目前還不清楚。本研究利用不同的小鼠酒精飼喂模型對(duì)免疫細(xì)胞在酒精性肝病及酒精性肝癌中的作用

3、進(jìn)行了初步探究，主要結(jié)果如下。
　　1.長(zhǎng)期飲酒加快肝細(xì)胞癌發(fā)展的免疫機(jī)制
　　我們利用多次腹腔注射二乙基亞硝胺(DEN)刺激成年野生型C57BL/6雄鼠誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌，并且在誘癌4.5個(gè)月時(shí)給予5％(V/V)酒精液體飼料和對(duì)照液體飼料飼喂。飼喂2.5個(gè)月后，即誘癌7個(gè)月時(shí)，觀察到酒精飼喂小鼠組肝臟腫瘤較對(duì)照組明顯增大。長(zhǎng)期飲酒后，血清ALT升高，肝臟IL-6、IL-17A表達(dá)升高，說明長(zhǎng)期飲酒加重肝臟炎癥;qPCR檢測(cè)到長(zhǎng)期

4、飲酒上調(diào)肝臟TIMP1、col1a1、MMP2、α-SMA、GFAP表達(dá)，說明長(zhǎng)期飲酒加快肝臟纖維化;肝臟E-cadherin、snail、MMP9表達(dá)升高，暗示長(zhǎng)期飲酒后肝臟上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變作用增強(qiáng);通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝臟免疫細(xì)胞比例，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期飲酒促進(jìn)肝臟巨噬細(xì)胞比例和絕對(duì)數(shù)顯著增加，并且呈現(xiàn)M2表型;此外，長(zhǎng)期飲酒使得肝臟CD8+T細(xì)胞比例和絕對(duì)數(shù)顯著降低。
　　結(jié)論:結(jié)果暗示在DEN誘導(dǎo)肝臟腫瘤的過程中，長(zhǎng)期飲酒一方面促進(jìn)肝臟病

5、理損傷，另一方面減少CD8+T細(xì)胞，削弱抗腫瘤免疫作用;增加巨噬細(xì)胞數(shù)目，且巨噬細(xì)胞具有M2的特征，從而增強(qiáng)促腫瘤免疫應(yīng)答，最終促進(jìn)肝臟腫瘤的進(jìn)展。
　　2.酒精性肝病中NKT10細(xì)胞對(duì)NK細(xì)胞的負(fù)調(diào)機(jī)制
　　已有報(bào)道在肝臟纖維化中，NK細(xì)胞通過IFN-γ抵御疾病進(jìn)展。我們?cè)贑57BL/6雌鼠中，采取chronic-binge酒精性脂肪肝模型，通過清除NK細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)脂肪肝（指標(biāo)為肝臟甘油三酯含量和病理性脂肪空泡）顯著加重，肝

6、臟炎癥水平（指標(biāo)為血清ALT）明顯降低;在IFN(μ)o缺失的GKO鼠中發(fā)現(xiàn)酒精性脂肪肝和炎癥水平較對(duì)照鼠均明顯加重，用IFN-γ體外刺激小鼠原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，脂質(zhì)代謝相關(guān)基因(Srebp-1，F(xiàn)as,Acc,Gpat，Scd1和FAT)表達(dá)上調(diào)，提示NK細(xì)胞和IFN(μ)o在抑制早期酒精性肝病中發(fā)揮重要作用。隨后我們?cè)贗L-10缺陷(IL-10-/-)小鼠中發(fā)現(xiàn)，NK細(xì)胞數(shù)目和功能明顯增加，酒精性脂肪肝病癥明顯減輕，當(dāng)清除該鼠的NK細(xì)胞

7、后，小鼠脂肪肝癥狀明顯加重，結(jié)果提示IL-10分子可能通過抑制NK細(xì)胞的功能和數(shù)目，從而加重酒精性脂肪肝。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明在chronic-binge模型中，肝臟iNKT細(xì)胞分泌IL-10的能力顯著增強(qiáng)。為此我們采用iNKT細(xì)胞缺失的Jα18-/-小鼠轉(zhuǎn)輸WTiNKT細(xì)胞和IL-10-/-iNKT細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)輸WTiNKT細(xì)胞后，NK細(xì)胞數(shù)目和功能顯著受到抑制，而轉(zhuǎn)輸IL-10-/-iNKT細(xì)胞后，則對(duì)NK細(xì)胞數(shù)目和功能沒有顯著影響