MicroRNA-21對心房顫動心肌纖維化及心肌成纖維細胞增殖的調(diào)控作用機制研究.pdf

1、目的：心房顫動（atrial fibrillation，AF）是臨床上最常見的快速型心律失常之一，心房顫動的發(fā)生發(fā)展機制一直是國內(nèi)外心血管領域的研究重點、熱點，已有研究證明心肌纖維化與 microRNAs之間存在一定的相關關系。本實驗旨在檢測microRNA-21及其調(diào)控蛋白 Smad7在大鼠心房顫動模型中的表達變化，microRNA-21 mimics和microRNA-21 inhibitors對大鼠心肌成纖維細胞活化增殖的影響，探

2、究microRNA-21在心房顫動心肌纖維化過程中的分子機制。
　　方法：利用皮下注射異丙腎上腺素（ISO）制備大鼠心房顫動心肌纖維化模型。隨機將60只SD雄性大鼠均分為空白對照組和實驗組，每組30只，其中實驗組給予皮下注射ISO5mg/kg·d、空白對照組給予等劑量生理鹽水皮下注射，連續(xù)注射14天后處死大鼠，取下心臟，分別獲取各組心肌組織標本。用Lipofectamine?2000 Reagent向大鼠心肌成纖維細胞瞬時轉(zhuǎn)染mi

3、croRNA-21 mimics和inhibitors及其陰性對照，48~72 h后檢測各指標。用HE和Masson染色法測算心肌組織中的心肌纖維化程度和膠原容積分數(shù)（CVF）；qRT-PCR檢測各組 microRNA-21，TGF-β1和Smad7的mRNA水平；Western blot法測定各組TGF-β1和Smad7的表達；MTT法檢測 microRNA-21 mimics和inhibitors對心肌成纖維細胞活化增殖的影響。

4、r>　　結(jié)果：HE染色和Masson染色顯示實驗組中大鼠心肌組織間質(zhì)中出現(xiàn)了明顯的膠原纖維增生，計算心肌間質(zhì)膠原容積分數(shù)（CVF）較空白對照組明顯增加；相對于正常組，大鼠心房顫動模型實驗組心房組織中microRNA-21和TGF-β1表達上調(diào)，而Smad7表達下降。轉(zhuǎn)染microRNA-21 mimics的大鼠心肌成纖維細胞中，microRNA-21高表達，TGF-β1表達上升，Smad7表達下降；轉(zhuǎn)染microRNA-21 mimic

5、s的心肌成纖維細胞增殖活性明顯增強；轉(zhuǎn)染microRNA-21 inhibitors的大鼠心肌成纖維細胞中，得到完全相反的結(jié)果。
　　結(jié)論：皮下注射 ISO能誘導大鼠心房顫動并使大鼠心肌發(fā)生明顯的纖維化，心房組織中microRNA-21的高表達可通過TGF-β1/Smad信號通路降低Smad7的表達，從而促進心肌纖維化的發(fā)生。microRNA-21 mimics可明顯增強心肌成纖維細胞增殖活性，microRNA-21 inhibi