循環(huán)纖維細(xì)胞與持續(xù)性房顫心房纖維化的相關(guān)性及其調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的:心房纖維化是心房顫動(dòng)（房顫）維持的基質(zhì)，并且可以作為預(yù)測患者射頻消融術(shù)后復(fù)發(fā)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。循環(huán)纖維細(xì)胞作為一類來源于骨髓，具備有分化為成纖維細(xì)胞能力的一類特殊的白細(xì)胞亞群，參與了多種纖維化疾病的發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)旨在研究循環(huán)纖維細(xì)胞是否參與了持續(xù)性房顫誘導(dǎo)的心房纖維化及其潛在的調(diào)控機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)隨機(jī)入選56例在我院首次接受CARTO三維標(biāo)測系統(tǒng)引導(dǎo)下射頻消融術(shù)的非瓣膜性房顫患者，包括40例持續(xù)性房顫患者（發(fā)病時(shí)間＞6個(gè)

2、月）和16例陣發(fā)性房顫患者，同時(shí)納入28例正常人作為對照組。我們采集了包括性別、年齡、收縮壓、舒張壓、血脂分析、血常規(guī)、凝血功能、靜息心率、心超以及相關(guān)藥物使用史等資料。我們分別從對照人群和房顫患者采集20ml靜脈血，使用流式細(xì)胞儀檢測外周血中循環(huán)纖維細(xì)胞（CD34和CollagenⅠ雙陽性）的百分比。同時(shí)，我們將剩余靜脈血中的白細(xì)胞進(jìn)行12天的體外培養(yǎng)，觀察到循環(huán)纖維細(xì)胞從懸浮圓形細(xì)胞逐漸轉(zhuǎn)變成梭形樣貼壁細(xì)胞。12天后我們通過流式細(xì)胞

3、分選儀從所有貼壁細(xì)胞中純化出循環(huán)纖維細(xì)胞（CD45和CollagenⅠ雙陽性）。我們利用CARTO電壓標(biāo)測系統(tǒng)對部分房顫患者左心房進(jìn)行了電壓標(biāo)測，根據(jù)心房低電壓分布區(qū)域評(píng)估其纖維化面積，并與循環(huán)纖維細(xì)胞百分比進(jìn)行相關(guān)性分析。在此基礎(chǔ)上我們對射頻消融術(shù)后患者進(jìn)行短期隨訪。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測了纖維連接蛋白（fibronectin），α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA），Ⅰ型膠原蛋白(collagenⅠ)的mRNA表達(dá)水平;采用免疫熒

4、光技術(shù)檢測α-SMA在培養(yǎng)后的循環(huán)纖維細(xì)胞中的表達(dá)量。
　　結(jié)果:1）持續(xù)性房顫組外周血中循環(huán)纖維細(xì)胞占白細(xì)胞數(shù)比例顯著高于陣發(fā)性房顫組和對照組（3.3±1.3％ vs.2.5±0.8％，2.0±0.8％，P＜0.05）;2）外周血白細(xì)胞培養(yǎng)12天后，持續(xù)性房顫患者組循環(huán)纖維細(xì)胞數(shù)占貼壁細(xì)胞數(shù)比例高于對照組（66±10.1％vs.48±7.9％，P＜0.01）和陣發(fā)性房顫組(66±10.1％vs.57±7.9％，P＜0.01)，陣

5、發(fā)性房顫組和對照組之間也存在明顯差異(57±7.9％vs.48±7.9％，P＜0.01)，該結(jié)果提示房顫患者外周血白細(xì)胞具備更強(qiáng)的向循環(huán)纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的能力;3）電壓標(biāo)測結(jié)果顯示，21例持續(xù)性房顫患者左心房均存在不同程度心肌纖維化，并且纖維化程度與外周血中循環(huán)纖維細(xì)胞百分比之間存在顯著線性正相關(guān)性(R=0.7167，P＜0.001);4)射頻術(shù)后隨訪1個(gè)月結(jié)果顯示，循環(huán)纖維細(xì)胞比例較高組(＞3.1％)的術(shù)后復(fù)發(fā)率顯著高于循環(huán)纖維細(xì)胞比例低

6、組(≤3.1％)(56％vs.20％);5)房顫患者的循環(huán)纖維細(xì)胞與對照組的循環(huán)纖維細(xì)胞在表型存在顯著的差異，表現(xiàn)為fibronectin、α-SMA、collagenⅠ、趨化因子受體CX3CR1在持續(xù)性房顫組的表達(dá)顯著高于對照組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:房顫觸發(fā)骨髓來源的循環(huán)纖維細(xì)胞的增殖和遷移，同時(shí)增強(qiáng)循環(huán)纖維細(xì)胞向（?。┏衫w維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的能力，最終加重了心房纖維化的進(jìn)程。外周血中循環(huán)纖維細(xì)胞比例可作為評(píng)估持續(xù)性房顫患者左