HPV高低?；蛐透腥緦m頸組織的比較蛋白質組學分析及其差異.pdf

1、第一部分 目的：研究HPV感染宮頸組織后蛋白質組表達情況，初步探討高、低危基因型感染宮頸組織后表達的差異，并對差異的蛋白點通過質譜分析其意義。 方法：首先采用測序法及l(fā)uminex法對42例臨床HPV感染的標本進行高、低?；蚍中?，分成HPV高?；蛐透腥緦m頸組織的CIN組，低?；蛐透腥緦m頸組織的CA組，每組篩選出3例標本，打成混合池，與正常對照3例標本混合池進行雙向凝膠電泳，比較之間的差異，選取差異大的蛋白點

2、，進行MALDI-TOF質譜分析。 結果： 1.對HPV感染陽性的31例女性泌尿生殖道尖銳濕疣和11例宮頸CIN組織標本，通過測序法和luminex法分型的結果為：(1)尖銳濕疣標本(無論長在什么部位)或CIN Ⅰ標本，其HPV感染的基因型均為6、11等低危型，測序表現(xiàn)出的是單一峰型，而宮頸CIN Ⅱ～Ⅲ，其HPV感染的基因型均為16、18、33、58等高危型或高危型的混合感染，測序表現(xiàn)出的是單峰或雜峰；(2)外陰和宮頸

3、同時患有尖銳濕疣的標本，其HPV感染的基因型是一致的。 2.將每組篩選的3例標本打成混合池，并對宮頸尖銳濕疣、宮頸CIN及對照宮頸上皮組織蛋白質組圖譜進行兩兩比較，HPV低?；蛐透腥镜膶m頸尖銳濕疣組織標本與正常宮頸組織標本相比有63個蛋白質點有顯著差異，其差異倍數(shù)最大的為20.2939，宮頸尖銳濕疣組表達上調的蛋白點有51個，下調的有12個蛋白點；HPV高?；蛐透腥镜膶m頸CIN組織標本與正常宮頸組織標本相比有47個蛋白質點有

4、顯著差異，宮頸CIN表達上調的蛋白點有21個，下調的有26個蛋白點，上調倍數(shù)最大的為11.2506倍，下調倍數(shù)最大的為9.00021倍。HPV高?；蛐透腥镜膶m頸CIN組織標本與低危基因型感染的宮頸尖銳濕疣組織標本相比有39個蛋白質點有顯著差異，宮頸CIN組較宮頸濕疣組表達上調的蛋白點有15個，下調的有24個蛋白點，上調倍數(shù)最大的為4.24857倍，下調倍數(shù)最大的為3.37334倍。 3.對3組26個差異蛋白質點進行分析，獲得了

5、22張肽質量指紋圖，軟件識別其有效肽片段峰后查詢數(shù)據(jù)庫，搜索后得到匹配的有18個蛋白質點，并通過查詢NCBInr數(shù)據(jù)庫，獲得初步鑒定的18個蛋白質的功能信息。它們主要與細胞代謝、信號傳導、細胞分泌、細胞骨架構建及細胞增值、分化與凋亡等相關。結論本實驗采用雙向凝膠電泳技術得到了HPV高、低?；蛐透腥緦m頸組織和正常宮頸上皮組織的蛋白組表達圖譜，并找到兩者之間的差異蛋白點。通過質譜分析及生物信息學技術鑒定了部分差異蛋白，其中一些可能與宮頸腫

6、瘤發(fā)生發(fā)展密切相關。為HPV感染宮頸組織的蛋白質數(shù)據(jù)庫的建立提供了有意義的資料。這些蛋白點能否作為診斷的標記物和治療的靶標，值得進一步研究。 第二部分 目的：探討HPV高、低?；蛐透腥緦m頸組織標本比較蛋白質組學，找出差異的蛋白質點，鑒定與宮頸CA或宮頸CIN發(fā)病相關的靶蛋白。 方法：應用雙向凝膠電泳(2-DE)、質譜分析和生物信息學等技術進行HPV高、低危基因型感染人體組織后2-DE圖譜的差異比較，找出差異的蛋

7、白點，通過質譜分析，得到PMF圖，再由Mascot軟件搜索NCBInr數(shù)據(jù)庫，找到相應蛋白點的功能信息，分析其表達改變的意義。 結果：通過對CIN組、CA組分別和正常宮頸組織、CIN組和CA組兩兩比較，每組分別找到了47、63、39個差異蛋白點，共選26個差異倍數(shù)較大的蛋白點進行分析，獲得了22張肽質量指紋圖，軟件識別其有效肽片段峰后查詢數(shù)據(jù)庫，搜索后匹配到18個蛋白點，通過查詢NCBInr數(shù)據(jù)庫，獲得初步鑒定的18個蛋白質的功