荷葉黃酮的分離及功能初步研究.pdf

1、荷葉是睡蓮屬植物蓮(NelumbonuciferaGaertn)的葉片，在全世界有著廣泛的分布，是一種既是食品又是藥品的天然植物。荷葉含有多種藥理活性成分。多年的臨床經(jīng)驗(yàn)表明，荷葉復(fù)方具有很強(qiáng)的降脂、減肥功能，其中黃酮和生物堿為主要活性物質(zhì)，但它們?cè)谡{(diào)節(jié)血脂、減肥方面的功效一直不明確，限制了廣闊的荷葉資源開發(fā)利用的深度。本文旨在通過對(duì)荷葉黃酮的提取、精制、分離純化，繼而對(duì)其進(jìn)行深度研究，并將荷葉黃酮、生物堿單體進(jìn)行調(diào)節(jié)血脂功能實(shí)驗(yàn)比較，

2、以揭示它們的生物活性，為有效利用荷葉資源打下基礎(chǔ)。為此本論文開展了以下工作： 1.荷葉黃酮最佳提取工藝的確定 設(shè)計(jì)了單因素和正交試驗(yàn)，研究超聲波輔助提取荷葉黃酮的最佳工藝條件。實(shí)驗(yàn)中以荷葉黃酮的提取率為指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)確定了荷葉黃酮提取工藝參數(shù)的適宜范圍，并進(jìn)一步通過正交實(shí)驗(yàn)L9(34)設(shè)計(jì)進(jìn)行篩選，研究了各因素對(duì)荷葉黃酮提取率影響的主次順序，確定了最佳提取參數(shù)。結(jié)果表明，超聲波提取輔助比直接用乙醇-水提取更加節(jié)時(shí)、

3、節(jié)能，提取率高；影響荷葉黃酮提取率的各因素的主次順序?yàn)楣桃罕?、溫度、時(shí)間；超聲波輔助提取荷葉黃酮的最佳提取參數(shù)為：乙醇濃度60％、時(shí)間40min、溫度70℃、固液比1：40、提取2次，在此工藝條件下荷葉黃酮的提取率達(dá)到100.92±0.37mg/g。 2.大孔樹脂對(duì)荷葉黃酮的分離純化 使用大孔樹脂吸附法對(duì)荷葉黃酮進(jìn)行了純化。通過靜態(tài)吸附-解吸實(shí)驗(yàn)，從HZ-801、HZ-802、HZ-803、HZ-806四種樹脂中篩選了H

4、Z-806大孔吸附樹脂對(duì)荷葉黃酮進(jìn)行純化，通過對(duì)吸附液濃度、吸附液流速、洗脫劑流速、洗脫劑濃度和用量等因素的考察，確定出最佳吸附工藝。結(jié)果表明HZ-806樹脂對(duì)荷葉黃酮類化合物具有良好的選擇吸附性，最佳吸附工藝為：上柱流速為2mLmin-1、上柱液濃度為1.91mgmL-1、解吸劑用量：樹脂量為4：1，水洗量為3倍的柱體積，洗脫流速為1mLmin-1，在此工藝條件下產(chǎn)品純度由28.97％提高到了89.04％。 3.荷葉黃酮類化合

5、物的組成分析 對(duì)分離純化后得到的黃酮制品，采用高效液相色譜(HPLC)分析其中組成，并采用半制備高效液相色譜對(duì)未知組分進(jìn)一步分離純化，通過紫外光譜(UV)、高效液相(HPLC)、核磁共振(NMR)(包括1H-NMR、13C-NMR)等手段分析，確定未知組分的結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示出荷葉中含有蘆丁和槲皮素，其中蘆丁為首次從荷葉中分離獲得。 4.荷葉黃酮含量變化規(guī)律的研究 對(duì)揚(yáng)州寶應(yīng)采集的不同生育期階段的荷葉進(jìn)行總黃酮含量、

6、蘆丁和槲皮素含量的研究表明：5月份種藕萌發(fā)，荷葉營養(yǎng)主要由種藕供應(yīng)，含量較高，達(dá)到111.94±0.18mg/g：至6月中旬，蓮藕完全轉(zhuǎn)入自養(yǎng)生長階段，老藕逐漸腐爛，此階段蓮藕生長含量變化旺盛，葉片高低錯(cuò)落，轉(zhuǎn)入營養(yǎng)與生殖生長并進(jìn)階段：至7月份后，蓮藕完全進(jìn)入新藕生長階段，荷葉含量較低：至8月中旬左右，生藕發(fā)育成形，大小變化不變，能量進(jìn)入儲(chǔ)蓄階段，荷葉含量較高，達(dá)到105.37+0.52mg/g；9月份后，葉片逐漸衰老，凋謝。荷葉中蘆丁