防治魚(yú)類(lèi)細(xì)菌性疾病復(fù)合型蛋黃粉的研制.pdf

1、伴隨著漁業(yè)的迅猛發(fā)展，魚(yú)類(lèi)細(xì)菌性疾病成為魚(yú)類(lèi)最嚴(yán)重的一大類(lèi)傳染性疾病，造成了巨大的危害和經(jīng)濟(jì)損失，防治策略主要有藥物防治、免疫防治和抗病育種。與畜禽傳染病的防治相比，我國(guó)魚(yú)病防治研究明顯落后。在理論上，魚(yú)的抗病育種具有一勞永逸的效果，但這是一個(gè)漫長(zhǎng)的過(guò)程，也難以獲得對(duì)多種疾病具有抗性的品種。既無(wú)行之有效的水體環(huán)境控制策略和措施，也無(wú)效果顯著和易于推廣的疫苗，因此形成對(duì)化學(xué)藥物和抗菌素的過(guò)分依賴(lài)，它們的長(zhǎng)期、大量和盲目使用，不僅導(dǎo)致病原體

2、耐藥性的產(chǎn)生、防治效果日益降低，而且已形成嚴(yán)重的水環(huán)境污染和水產(chǎn)品中有害物質(zhì)的大量殘留，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。因此，只有大力開(kāi)發(fā)和合理使用水產(chǎn)專(zhuān)用藥物，才能更有效地防治水產(chǎn)動(dòng)物疾病，保護(hù)人類(lèi)自身的健康和安全。雞卵黃抗體(IgY)作為一種免疫球蛋白，和血清抗體(IgG)的功能相似，且生產(chǎn)成本較低，易大量生產(chǎn)，不會(huì)帶來(lái)耐藥和藥物殘留等一系列問(wèn)題，有望開(kāi)發(fā)為一類(lèi)可替代抗生素的高效生物防治制劑。 本研究對(duì)若干魚(yú)類(lèi)主要病原菌及其致病性進(jìn)行驗(yàn)

3、證后，對(duì)各抗原之間的交叉反應(yīng)性進(jìn)行了研究，還比較了IgY的四種提取方法以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EIASA)與微量凝集反應(yīng)(MA)兩種檢測(cè)方法。結(jié)果表明，各菌株之間幾乎不能交叉反應(yīng)，通過(guò)比較，IgY的最佳提取方法被確定，并決定采用微量凝集反應(yīng)作為檢測(cè)IgY的方法。在此基礎(chǔ)上用微量凝集法定期檢測(cè)由不同免疫程序獲得的IgY效價(jià)并制定效價(jià)曲線(xiàn)，結(jié)果顯示，有的抗原之間有免疫競(jìng)爭(zhēng)或抑制現(xiàn)象，用三聯(lián)苗免疫產(chǎn)蛋雞四次比較好。 為了研究蛋黃粉的生物

4、學(xué)活性，用噴霧干燥法把多免后的高效價(jià)蛋黃液制成蛋黃粉，由蛋黃粉IgY的凝集效價(jià)以及抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，噴霧干燥對(duì)IgY的效價(jià)和生物學(xué)活性基本不造成影響，凝集效價(jià)是24的含特異性抗體的卵黃水溶性組分(WSF)做625倍稀釋后仍產(chǎn)生50％的相應(yīng)抑菌效果，可見(jiàn)，蛋黃粉能有效地抑制相應(yīng)細(xì)菌的生長(zhǎng)與繁殖；對(duì)噴霧干燥工藝進(jìn)行了非指定性細(xì)菌滅活試驗(yàn)，結(jié)果顯示，該工藝能有效的滅活細(xì)菌：動(dòng)物試驗(yàn)方面，用制備的高價(jià)蛋黃粉定期適量地投喂鯽魚(yú)，確定了其安全性、可

5、口性，并能增強(qiáng)魚(yú)的抵抗力和產(chǎn)生一定特異性保護(hù)力，凝集效價(jià)是26的卵黃粉對(duì)1倍和2倍最小致死劑量的相應(yīng)致病菌可分別產(chǎn)生90％和75％的保護(hù)效果，證實(shí)了高效價(jià)卵黃粉防治魚(yú)類(lèi)細(xì)菌性疾病的臨床應(yīng)用前景。 另外，從各嗜水氣單胞菌菌株提取了Aer毒素和ECPase，對(duì)他們及其生物學(xué)活性進(jìn)行了驗(yàn)證。然后，設(shè)計(jì)不同的試驗(yàn)組，并用溶血抑制、溶蛋白抑制試驗(yàn)和微量凝集試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)并制備IgY效價(jià)曲線(xiàn)，結(jié)果顯示，不同菌株的Aer毒素和ECPase能分別交