防治仔豬大腸桿菌性腹瀉復(fù)合型全蛋粉的初步研制.pdf

1、研究?jī)?nèi)容一：兩種方法檢測(cè)卵黃抗體效價(jià)的比較 為了確定一種特異性強(qiáng)、敏感性高、簡(jiǎn)便、快捷的抗體檢測(cè)方法，本研究在用F41油佐劑滅活苗免疫蛋雞獲得卵黃抗體后，分別用微量凝集法和瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)卵黃抗體中F41抗體的效價(jià)，比較兩種方法測(cè)定結(jié)果的差異。結(jié)果表明，兩種方法均可以用于卵黃抗體效價(jià)的檢測(cè)，瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定的結(jié)果比微量凝集法測(cè)定的結(jié)果高兩個(gè)滴度。鑒于微量凝集法的快速、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，該方法被確定為后期實(shí)驗(yàn)中血清抗體和卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定方

2、法。 研究?jī)?nèi)容二: 雞抗豬大腸桿菌血清抗體和卵黃抗體動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其相互關(guān)系的研究 用豬源大腸桿菌四價(jià)(K88、K99、987P、F41)滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，微量凝集法定期檢測(cè)蛋雞血清抗體和卵黃抗體的效價(jià)。結(jié)果表明，血清抗體比卵黃抗體出現(xiàn)早，免疫蛋雞血清中和卵黃中四種抗體的消長(zhǎng)規(guī)律基本相似，但不同抗體水平之間存在一定的差異；整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間血清抗體水平均比卵黃抗體水平高。 研究?jī)?nèi)容三:重組人溶菌酶在雞蛋清中的表達(dá)與卵

3、黃抗體效價(jià)相互關(guān)系的研究 本實(shí)驗(yàn)按菌苗免疫組，質(zhì)粒注射組，菌苗免疫質(zhì)粒注射組，把雞只分為三組，微量凝集法測(cè)定卵黃抗體的效價(jià)，RBB-R染料法檢測(cè)人溶菌酶的表達(dá)量。結(jié)果表明菌毛免疫組卵黃抗體的效價(jià)和質(zhì)粒注射組人溶菌酶的表達(dá)量和表達(dá)時(shí)間與菌苗免疫質(zhì)粒注射組的結(jié)果相似，說(shuō)明菌苗免疫同時(shí)注射質(zhì)粒對(duì)卵黃抗體效價(jià)和人溶菌酶表達(dá)幾乎沒有影響，證實(shí)了兩者結(jié)合應(yīng)用的可行性，為全蛋粉的研制和人溶菌酶的生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。 由產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(

4、ETEC)引起的仔豬腹瀉是一種常見病，該病具有發(fā)病急，傳播快，死亡率高等特點(diǎn)，嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)。ETEC主要有兩類毒力因子，即腸毒素(ST和LT)和黏附素性菌毛。ETEC首先通過(guò)黏附素性菌毛與小腸黏膜上皮細(xì)胞上的特異性受體相結(jié)合而定居下來(lái)，繼而大量增殖，產(chǎn)生并積累腸毒素使腸上皮細(xì)胞分泌功能亢進(jìn)而發(fā)生腹瀉。生產(chǎn)上防制該病主要是使用大腸桿菌多價(jià)苗和基因工程苗免疫母畜以保護(hù)仔畜免遭侵害，但母源抗體持續(xù)時(shí)間短，且存在個(gè)體差異，不足以保護(hù)整個(gè)仔畜生

5、長(zhǎng)階段。治療多采用抗菌藥物或動(dòng)物高免血清，但長(zhǎng)期服用抗生素容易產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留，對(duì)人、畜的健康造成危害；用特異性抗體阻斷ETEC對(duì)小腸上皮細(xì)胞的黏附是防治本病的有效手段。仔畜口服高免疫血清雖然能夠預(yù)防腹瀉，但因其生產(chǎn)成本較高，產(chǎn)量較低而在使用中受到限制。雞卵黃抗體(IgY)作為一種免疫球蛋白，和血清抗體(IgG)的功能相似，但生產(chǎn)成本較低，易于大量生產(chǎn)，有望開發(fā)為一類可替代抗生素的高效生物防治制劑。 本研究在用大腸桿菌油佐劑

6、滅活苗免疫蛋雞獲得卵黃抗體后，分別用微量凝集法和瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)卵黃抗體中抗體的效價(jià)，比較兩種方法測(cè)定結(jié)果的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種方法均可以用于卵黃抗體效價(jià)的檢測(cè)，瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定的結(jié)果比微量凝集法測(cè)定的結(jié)果高兩個(gè)滴度，但微量凝集法更方便、快捷。在此基礎(chǔ)上用微量凝集法定期檢測(cè)經(jīng)大腸桿菌四價(jià)(K88、K99、987P、F41)滅活疫苗免疫的蛋雞血清抗體和卵黃抗體的效價(jià)。結(jié)果表明，血清抗體比卵黃抗體出現(xiàn)早，免疫蛋雞血清中和卵黃中四種抗體的消長(zhǎng)

7、規(guī)律基本相似，但不同抗體水平之間存在一定的差異。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間血清抗體水平均比卵黃抗體水平高。 通過(guò)ETEC對(duì)仔豬小腸上皮細(xì)胞的黏附和黏附抑制試驗(yàn)，表明經(jīng)多次免疫后獲得的高效價(jià)卵黃抗體能有效地阻止ETEC對(duì)仔豬小腸上皮細(xì)胞的黏附。實(shí)驗(yàn)中，黏附組單個(gè)細(xì)胞黏附的K88+菌數(shù)平均為24.58個(gè)；而經(jīng)卵黃抗體(效價(jià)為24)處理過(guò)的黏附抑制組單個(gè)細(xì)胞黏附菌數(shù)平均為0.276個(gè)。充分證實(shí)了卵黃抗體對(duì)防治仔豬腹瀉的臨床應(yīng)用價(jià)值。 為了進(jìn)