miR-124通過靶向Delta蛋白在阿爾茨海默病中的作用研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是屬于神經(jīng)退行性疾病，它以漸進性認知功能障礙和記憶喪失為特征。大都起病于老年或老年前期，潛隱發(fā)病，緩慢不可逆地進展。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，65歲以后年齡每增加5歲，發(fā)病率將增加一倍，并且女性較男性多見。它主要病理特點為細胞外老年斑沉積(senile plaque，SP)、呈雙螺旋細絲的神經(jīng)原纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangle，NFT）以及神經(jīng)元數(shù)量減少等。A

2、D的易感因素包括:腦血管病、腦損傷、慢性炎癥、缺血缺氧、基因多態(tài)性及毒性反應(yīng)等。目前，關(guān)于AD的發(fā)病機制尚不明確。
　　miRNA是一類長約22nt的小分子RNA，在轉(zhuǎn)錄后水平、翻譯水平調(diào)節(jié)靶基因的表達。目前，已鑒定出上千種miRNAs，它們能夠調(diào)控機體大約90％以上的基因表達。研究人員發(fā)現(xiàn)miRNA水平紊亂可能導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生，尤其miRNA在神經(jīng)退行性疾病中的作用，引起了科學(xué)家極大的關(guān)注。
　　miR-124是一種主要

3、集中于中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達的miRNA。miR-124從果蠅、小鼠到人等各個物種中普遍存在，并且其序列高度保守。已有文獻報道，AD患者和多種AD疾病動物模型的腦組織中都發(fā)現(xiàn)miR-124水平下調(diào)，提示其在AD發(fā)生發(fā)展中的重要作用。
　　本實驗室前期工作主要包括miR-124功能缺失動物模型及過表達果蠅的建立和w1118與miR-124 knock out果蠅mRNA表達譜芯片分析。在此基礎(chǔ)上，驗證miR-124的靶基因表達水平，進而探

4、究miR-124及其靶基因在AD中的作用。
　　首先，通過分析芯片結(jié)果，發(fā)現(xiàn)多種與神經(jīng)系統(tǒng)密切相關(guān)的信號通路表達水平存在異常，其中Notch信號通路表現(xiàn)較為明顯，并且Notch信號通路中的psn和delta mRNA水平上升明顯，作為候選的靶基因;然后通過dual-luciferase assay在細胞水平檢測miR-124與靶基因3'UTR的相互作用。結(jié)果顯示:psn和delta都可能是miR-124的靶基因。
　　其次，

5、在miR-124knock out和過表達果蠅中進一步檢測靶基因蛋白水平表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-124與Delta存在相互作用。
　　最后，分析real-time PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)AD果蠅腦組織中miR-124下調(diào)，同時WesternBlot結(jié)果發(fā)現(xiàn)AD果蠅head中Delta蛋白水平上升。并且通過AD果蠅模型研究發(fā)現(xiàn):在AD果蠅神經(jīng)系統(tǒng)中上調(diào)miR-124可使AD果蠅攀爬和學(xué)習(xí)記憶能力得到部分挽救，上調(diào)Delta蛋白水平可使AD