miR-124通過(guò)調(diào)控flotillin-2對(duì)精子頂體形成的作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究miR-124通過(guò)調(diào)控flotiliin-2對(duì)精子發(fā)生過(guò)程中頂體形成的作用，并進(jìn)一步探討miR-124在頂體形成過(guò)程中的表達(dá)機(jī)制。
　　方法：首先，運(yùn)用生物信息學(xué)軟件驗(yàn)證miR-124與flotillin-2的mRNA3'-UTR存在互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn);然后，采用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)探討miR-124對(duì)flotillin-2的靶向調(diào)控關(guān)系;接著，采用睪丸網(wǎng)微注射技術(shù)，將miR-124活性片段直接注射入三周齡雄性小鼠的生精小管

2、，48小時(shí)后運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白免疫技術(shù)驗(yàn)證miR-124對(duì)flotillin-2的影響;最后，在睪丸網(wǎng)微注射三周后，運(yùn)用光學(xué)顯微鏡和透射電鏡觀察小鼠精子的形態(tài)。
　　結(jié)果：生物信息學(xué)證實(shí)miR-124與flotillin-2的mRNA3'-UTR存在直接互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)miR-124表達(dá)上調(diào)，flotillin-2的表達(dá)水平下降，miR-124對(duì)flotillin-2的表達(dá)起著負(fù)向調(diào)節(jié)的作用。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的精子畸

3、形率明顯增加(28.5％ vs.19.9％，P=4.68*10-5)，特別是頭部畸形(20.7％vs.13.7％，P=0.025)，這些差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且大部分頭部畸形精子的頂體都有異常。透射電鏡顯示頭部畸形小鼠精子的超微結(jié)構(gòu)為：頂體缺失；頂體形態(tài)異常----頂體中存在分散的、沒(méi)有融合的小顆?；蛐∧遗?存在較大的頂體囊泡;存在殘留的或退化的高爾基復(fù)合體。
　　結(jié)論：miR-124可以通過(guò)調(diào)控flotillin-2的表達(dá)影響精