乳腺癌新同源異形盒基因BP1的克隆.pdf

1、目的:從人乳腺癌細(xì)胞或組織中克隆乳腺癌新同源異形盒基因Bp1的公開讀碼框架(ORF)約長720bp,構(gòu)建PMD18-T重組載體,為以后的進(jìn)一步基因調(diào)控及早期診斷等實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ).方法:1、培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞株T47D、MCF7.2、從乳腺癌細(xì)胞和組織以及正常組織中提取RNA,然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA.3、設(shè)計(jì)引物,RT-PCR檢測不同組織和細(xì)胞中Bp1 mRNA的表達(dá).4、設(shè)計(jì)引物,用半巢式PCR方法從T47D細(xì)胞中擴(kuò)增Bp1基因的公開讀碼

2、框架(ORF).5、擴(kuò)增產(chǎn)物連接入PMD18-T載體中構(gòu)建重組質(zhì)粒,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5 α細(xì)菌,提取重組質(zhì)粒用EcoRI酶切鑒定.6、克隆的序列測序驗(yàn)證.結(jié)果:1、驗(yàn)證Bp1基因在人乳腺癌細(xì)胞系T47D、MCF7及乳腺癌組織中異常表達(dá).2、用巢式PCR方法,從乳腺癌T47D細(xì)胞中克隆出Bp1公開讀碼框架(ORF)720bp,并構(gòu)建PMD18-T重組質(zhì)粒,且測序證實(shí).結(jié)論:1、Bp1基因在某些人乳腺癌細(xì)胞系及乳腺癌組織中異常表達(dá).2、克隆