糖尿病腎病尾加壓素Ⅱ水平及腎組織表達(dá)的初步研究.pdf

1、研究背景： 糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一。雖然通過(guò)飲食控制、體育鍛煉、各種降糖藥物的應(yīng)用改善了糖尿病本身的血糖及代謝異常，改善了糖尿病患者的臨床癥狀，循證醫(yī)學(xué)研究表明腎素一血管緊張素系統(tǒng)(RAS)阻斷劑血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶受體拮抗劑(ARB)的應(yīng)用可在一定程度上有效地保護(hù)DN的腎功能，延緩腎衰進(jìn)展，在防治DN進(jìn)展方面起了重要作用。然而，DN仍然是目前慢性腎臟病領(lǐng)域中難

2、以取得突破性進(jìn)展的主要疾病之一，其發(fā)病率和死亡率更是逐年增加。DN是多因素綜合作用的結(jié)果，已經(jīng)證明在DN發(fā)展過(guò)程中，腎臟血流動(dòng)力學(xué)的改變起著非常重要的作用，目前的研究認(rèn)為它涉及到糖代謝紊亂、血管活性物質(zhì)的釋放以及血管自身反應(yīng)性等諸多因素。其中，腎內(nèi)血管活性物質(zhì)，諸如腎素一血管緊張素系統(tǒng)、前列腺素、心房肽及內(nèi)皮細(xì)胞衍生的一系列舒張血管物質(zhì)(如NO)等均參與了腎臟血流動(dòng)力學(xué)的變化。這些活性物質(zhì)的變化，對(duì)預(yù)測(cè)DN的發(fā)生、發(fā)展及評(píng)價(jià)其預(yù)后有重要

3、意義。因此，既要從器官和組織細(xì)胞水平觀察DN進(jìn)程的變化，更要從分子水平去認(rèn)識(shí)DN的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。尾加壓素Ⅱ (U Ⅱ )最初是從硬骨魚(yú)脊髓尾垂體中分離出來(lái)的生長(zhǎng)抑素樣環(huán)肽，后來(lái)發(fā)現(xiàn)廣泛存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)。1999年Ames等發(fā)現(xiàn)在多種外周組織也有U Ⅱ的表達(dá)，包括腎臟，并且人體中有U Ⅱ的特異性受體，一種孤立的G蛋白耦聯(lián)受體GPR14(現(xiàn)命名為UT)，廣泛存在于各種組織中，Maguire等首次發(fā)現(xiàn)人類(lèi)UT結(jié)合位點(diǎn)在腎皮質(zhì)。研究表明u Ⅱ

4、有很強(qiáng)的縮血管作用，比內(nèi)皮素-1(ET-1)強(qiáng)10余倍，是迄今發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)最強(qiáng)的縮血管活性肽。近來(lái)UⅡ在慢性腎臟病中的病理作用受到廣大腎病研究者的關(guān)注，它被認(rèn)為是繼血管緊張素Ⅱ、醛固酮和心房肽之后作用于腎臟病理生理的又一重要血管活性肽。隨著UⅡ在人體組織中尤其是腎皮質(zhì)表達(dá)的發(fā)現(xiàn)，UⅡ與腎臟疾病關(guān)系的臨床研究亦逐漸深入，這必將進(jìn)一步揭示UⅡ在人體內(nèi)的生物學(xué)作用。近期國(guó)外學(xué)者關(guān)于DN時(shí)血漿及尿UⅡ含量的變化及其蛋白表達(dá)方面的研究結(jié)果也不一致。

5、 第一部分研究了糖尿病腎病患者血漿及尿UⅡ水平的變化，探討UⅡ與代謝及腎功能變化之間的關(guān)系，證明在DN發(fā)展過(guò)程中，UⅡ參與了糖尿病腎病的病理調(diào)節(jié)，為臨床DN診斷、程度判定以及指導(dǎo)臨床治療提供理論依據(jù)和新的客觀指標(biāo)。 第二部分研究了在DN情況下SD大鼠腎組織UⅡ蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步闡明DN時(shí)UⅡ蛋白表達(dá)水平的變化，及其腎臟自分泌和/或旁分泌的作用。為DN的防治提供新的理論依據(jù)及研究方向。 目的： 1．通過(guò)研究

6、DN患者血漿及尿UⅡ水平的變化，闡明這一新的血管活性物質(zhì)在DN發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的變化意義，為臨床DN診斷提供新的客觀指標(biāo)： 2．通過(guò)對(duì)血漿及尿UⅡ水平和代謝、腎功能變化關(guān)系的研究，探討DN時(shí)UⅡ變化的影響因素，闡明DN與UⅡ的關(guān)系，為臨床DN程度判定以及指導(dǎo)臨床治療提供理論依據(jù)和新的方向： 3．通過(guò)DN時(shí)SD大鼠腎組織的免疫組化定性分析腎臟UⅡ蛋白表達(dá)，進(jìn)一步闡明DN時(shí)UⅡ蛋白水平變化情況，和腎臟自分泌和/或旁分泌的作用方

7、式。 方法： 1．選擇42例2型糖尿病患者和13例健康體檢者進(jìn)入研究；根據(jù)肌酐清除率(Ccr)把2型糖尿病患者分成三組：A組，Ccr≥60 ml/min·m<'2>；B組，30≤Ccr<60 ml/min·m<'2>；C組，Ccr<30 ml/min·m<'2>。另選13例健康體檢者作為正常對(duì)照組。測(cè)定臨床指標(biāo)：空腹血糖、糖化血紅蛋白、血清蛋白、甘油三酯、總膽固醇、血清肌酐等； 2．分別采集抗凝靜脈血及晨尿，4℃

8、低溫離心，留取血漿及尿標(biāo)本置于-70℃低溫冰箱保存，待檢驗(yàn)； 3．采用放射免疫方法檢測(cè)UⅡ含量； 4．動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組(C)及實(shí)驗(yàn)組(D)，采用鏈脲佐菌素(STZ)糖尿病模型，5周后取血檢驗(yàn)一般指標(biāo)，處死動(dòng)物，腎臟生理鹽水灌注后，4％多聚甲醛灌注，腎組織常規(guī)石蠟包埋； 5．免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)SD大鼠糖尿病狀態(tài)下腎組織UⅡ蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)論： 1．在DN患者中，血漿及尿