南瓜多糖對(duì)鏈脲菌素誘導(dǎo)的胰島損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：南瓜多糖對(duì)大鼠鏈脲菌素性胰島損傷及血糖的影響 目的：制備鏈脲菌素性糖尿病大鼠模型，觀察南瓜多糖(PP)對(duì)糖尿病大鼠的降血糖作用及對(duì)糖尿病大鼠胰島損傷的保護(hù)作用和作用機(jī)制。 方法：大鼠腹腔注射鏈脲菌素(STZ)60mg／kg，建立鏈脲菌素性糖尿病模型。不同濃度的PP灌胃進(jìn)行治療，葡萄糖氧化酶法檢測(cè)血糖值，觀察PP灌胃后對(duì)STZ致糖尿病模型大鼠的降糖作用；放免法測(cè)定血清胰島素；通過(guò)測(cè)定血清中SOD、MDA、NO含量

2、觀察即對(duì)糖尿病大鼠自由基損傷的保護(hù)作用；透射電子顯微鏡觀察鏈脲菌素性糖尿病大鼠胰島細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)的變化；采用免疫組化的方法分析PP對(duì)鏈脲菌素性糖尿病大鼠Fas和Fas-L蛋白表達(dá)的影響；采用RT-PCR的方法觀察PP對(duì)STZ損傷的大鼠胰島凋亡調(diào)控基因Bax和Bcl-2表達(dá)的影響。 結(jié)果：(1)PP中劑量和大劑量組能明顯降低STZ損傷的糖尿病模型大鼠的血糖值；(2)PP大劑量治療三周后，能升高糖尿病大鼠血清中的胰島素值；(3)PP

3、中、大劑量組糖尿病大鼠血清中SOD值明顯增加，MDA、NO的量顯著減少；(4)透射電鏡觀察大鼠胰島細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)PP對(duì)STZ損傷的胰島細(xì)胞具有保護(hù)作用；(5)PP小、中、大劑量組大鼠胰腺組織中Fas／Fas-L蛋白的表達(dá)率明顯低于STZ模型組；(6)給藥三周后，PP小劑量、中劑量、大劑量組大鼠Bcl-2基因的表達(dá)顯著增加，PP中劑量、大劑量組大鼠Bax基因的表達(dá)顯著下降，即中劑量、大劑量組大鼠Bcl-2與Bax的比值顯著增加。

4、 結(jié)論：南瓜多糖(PP)可降低鏈脲菌素性糖尿病大鼠的空腹血糖值，并且對(duì)鏈脲菌素引起的大鼠胰島損傷具有保護(hù)作用。其機(jī)制可能與PP減少胰島細(xì)胞的凋亡有關(guān)。 第二部分：南瓜多糖對(duì)鏈脲菌素誘導(dǎo)的大鼠胰島β細(xì)胞損傷的保護(hù)作用 目的：在原代培養(yǎng)的大鼠胰島細(xì)胞上，觀察南瓜多糖對(duì)鏈脲菌素?fù)p傷的大鼠胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。 方法：將原代培養(yǎng)的大鼠胰島細(xì)胞分為6組：即正常對(duì)照組(0．5％DMSO培養(yǎng)液)；STZ損傷模型

5、組(8mmol／1STZ)；Gl-PS陽(yáng)性對(duì)照組(0．5mg／mlGl-PS)；PP小劑量組(0．25mg／mlPP)；PP中劑量組(0．5mg／mlPP)；PP大劑量組(1mg／mlPP)。測(cè)定各組胰島細(xì)胞培養(yǎng)液中的SOD、MDA、NO含量；采用MTT、Hochest染色、PI單染FCM檢測(cè)各組細(xì)胞活力、凋亡率；采用RT-PCR的方法觀察PP對(duì)STZ誘導(dǎo)的大鼠胰島細(xì)胞損傷的凋亡調(diào)控基因Bax／Bcl-2表達(dá)的影響。 結(jié)果：(1

6、)MTT比色實(shí)驗(yàn)顯示：PP可以增強(qiáng)STZ損傷的胰島細(xì)胞的活力；(2)PP中劑量、大劑量組胰島細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)SOD值明顯增加，MDA、NO的量顯著減少；(3)Hochest染色后，觀察到PP可以減少STZ損傷的胰島細(xì)胞的凋亡率；(4)PI單染FCM檢測(cè)結(jié)果顯示，PP可以減少STZ損傷的胰島細(xì)胞的凋亡率；(5)RT-PCR測(cè)定顯示PP可減少胰島細(xì)胞Bax、增加胰島細(xì)胞Bcl-2基因的表達(dá)。 結(jié)論：南瓜多糖對(duì)鏈脲菌素?fù)p傷的大鼠胰島β細(xì)胞