不同濃度富血小板血漿復(fù)合異種小牛脫蛋白骨促進(jìn)前交叉韌帶重建后腱-骨愈合的組織學(xué)觀察.pdf

1、目的：前交叉韌帶(anterior cruciate ligament，ACL)重建中腱-骨愈合情況是手術(shù)成敗的關(guān)鍵因素。將不同濃度富血小板血漿(platelet richplasma，PRP)/異種小牛脫蛋白骨(deproteinized bone，DPB)凝膠復(fù)合物作為骨隧道填充物，觀察ACL重建后腱-骨愈合的組織學(xué)變化，探討該復(fù)合物對(duì)腱-骨愈合的促進(jìn)作用，并確定PRP的最佳濃度。
　　 方法：取新西蘭大白兔耳中央動(dòng)脈血8m

2、L，采用Landesberg方法制備PRP，并將上清液作為稀釋劑，制備濃度分別為30％、60%、100%的PRP。取新鮮新生小牛股骨骺端松質(zhì)骨，經(jīng)30%H2O2、乙醚交替浸泡24h，連續(xù)6次，制備DPB。將DPB浸泡于不同濃度PRP中并加入激活劑制備PRP/DPB凝膠復(fù)合物。取54只8～12月齡新西蘭大白兔，體重(2.5±0.4)kg，隨機(jī)分成3組(n=18)，分別為30%PRP/DPB凝膠復(fù)合物組(A組)、60%PRP/DPB凝膠復(fù)合

3、物組(B組)、100%PRP/DPB凝膠復(fù)合物組(C組)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物制備雙側(cè)ACL缺損模型。隨機(jī)取一側(cè)下肢以對(duì)應(yīng)濃度的PRP/DPB凝膠復(fù)合物作為骨隧道填充物，以自體半腱肌肌腱重建ACL，作為實(shí)驗(yàn)側(cè)；另一側(cè)行自體半腱肌肌腱重建ACL，作為對(duì)照側(cè)。術(shù)后觀察各組動(dòng)物一般情況，于術(shù)后3、6、12周雙膝關(guān)節(jié)行大體觀察及HE染色，光鏡下觀察腱-骨間愈合情況，并參照Demirag等標(biāo)準(zhǔn)對(duì)腱-骨界面愈合情況進(jìn)行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)半定量評(píng)價(jià)。
　　

4、 結(jié)果大體觀察：術(shù)后3周各組關(guān)節(jié)滑液稍增多，股骨隧道內(nèi)未見骨樣組織；6周時(shí)各組無(wú)關(guān)節(jié)積液，隧道內(nèi)口見瘢痕組織增生；12周時(shí)各組移植肌腱與骨隧道壁纖維組織連接致密。組織學(xué)觀察：A組實(shí)驗(yàn)側(cè)術(shù)后3周，腱-骨界面間形成新生肉芽組織界面；6周時(shí)腱-骨界面間出現(xiàn)寬度不一的Sharpey樣纖維；12周時(shí)腱-骨界面Sharpey樣纖維排列有序，形成不規(guī)則、模糊的“潮線”。B組實(shí)驗(yàn)側(cè)在各時(shí)間點(diǎn)腱-骨界面膠原纖維連接均優(yōu)于其他各組；術(shù)后3周腱-骨界面發(fā)現(xiàn)排

5、列較規(guī)整的類軟骨細(xì)胞；6周時(shí)腱-骨界面骨隧道類軟骨細(xì)胞單位面積數(shù)量明顯多于其他組；12周時(shí)腱-骨界面可見移植物類軟骨細(xì)胞增生，分化成熟，Sharpey樣纖維連接致密有序。C組實(shí)驗(yàn)側(cè)3周時(shí)腱-骨界面膠原纖維連接與A組實(shí)驗(yàn)側(cè)及對(duì)照側(cè)相似，6、12周相對(duì)成熟的致密結(jié)締組織分化較差。參照Demirag等標(biāo)準(zhǔn)對(duì)腱-骨界面愈合進(jìn)行分級(jí)，術(shù)后3、6周B組實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)、術(shù)后12周B組實(shí)驗(yàn)側(cè)與C組實(shí)驗(yàn)側(cè)，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；其余各組