葡萄渣中反式白藜蘆醇的提取純化及其清除自由基能力的研究.pdf

1、本實驗以生產(chǎn)葡萄酒后的副產(chǎn)物--葡萄渣為原料，從中提取具有多種生理功能的反式白藜蘆醇。對反式白藜蘆醇的提取條件、純化方法和清除自由基能力進行了研究，為葡萄渣的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。 反式白藜蘆醇的檢測方法采用紫外分光光度法和高效液相色譜法。采用紫外分光光度法測定時，確定出最佳吸收波長為306nm，并得出了標準曲線的回歸方程為：y=0.1122x-0.0132(R2=0.9991)，濃度范圍為0～8μg/mL；采用高效液相色譜法測

2、定時，所用的色譜條件是：流動相為甲醇-水溶液(50:50，v/v)、流速為0.8mL/min、進樣量為10μL、柱溫為室溫，所得到的反式白藜蘆醇標準品的色譜圖峰形比較好，且所得出的標準曲線的回歸方程為：y=60297x-10418(R2=0.9997)。反式白藜蘆醇濃度在0.5μg/mL～20～g/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，最低檢測限為0.5μg/mL。 采用80％甲醇、80％乙醇、80％丙酮和乙酸乙酯等有機溶劑對葡萄渣進行

3、了提取，結(jié)果表明80％乙醇對反式白藜蘆醇的提取效果比較好。 在對提取條件進行優(yōu)化的過程中，采用了三因素三水平的響應(yīng)面分析方法。最佳提取條件結(jié)果為：溫度69℃、時間61min、液固比46mL/g，其理論最大提取含量為104.39μg/g，經(jīng)過驗證實驗所得到的實際提取含量為103.86μg/g。各因素影響程度從大到小依次排列為液固比＞提取時間＞提取溫度。 采用大孔吸附樹脂法和堿提酸沉法對反式白藜蘆醇進行了純化工藝的研究。大孔

4、吸附樹脂法中選擇了用AB-8樹脂來分離純化，其在4h左右基本完成對反式白藜蘆醇的吸附；當反式白藜蘆醇的濃度為70.6μg/mL，時，AB-8樹脂的吸附效果好；對吸附后的AB-8樹脂采用75％的乙醇溶液、以流速0.75BV/h進行解吸，大約需消耗5.5BV左右的解吸劑就基本能把反式白藜蘆醇解吸出來；所得到的反式白藜蘆醇初產(chǎn)品純度為26.32％。堿提酸沉法中最后采用pH=12的NaOH溶液進行提取，并用HCl溶液調(diào)整到溶液pH=3。最終產(chǎn)品