豬精液5mL大管冷凍保存方法的建立及優(yōu)化.pdf

1、采用手握法采集成年上海白豬精液，收集中段富含精子部分，配制不同的稀釋液，在不同條件下進(jìn)行凍前預(yù)處理，并采用不同的冷凍高度進(jìn)行冷凍，再用不同的解凍方法進(jìn)行解凍，然后進(jìn)行體外授精和人工授精試驗(yàn)；同時(shí)，還對冷凍前后精液的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了電鏡觀察.結(jié)果如下： 1.在冷凍I液中添加0.1％的N-AcGA( N-Acetyl-D-Glucosamine，N-乙酰-D-氨基葡萄糖)，解凍后精子的活力和頂體完整率最高，分別為50.00％和56.6

2、0％；冷凍II液中以4％的甘油濃度最好，解凍后精子的活力、質(zhì)膜完整率和頂體完整率可分別達(dá)52.50％、52.08％和77.67％；冷凍液中添加終濃度為10％或20％的卵黃可有效保護(hù)精子的活力；在4℃中平衡2h，凍后頂體完整率比對照組(Oh)有顯著提高(P<0.05)；分別選取卵黃(15％和20％)、甘油(1％和15％)和OEP(Orvus Es Paste，氨基-鈉-十二烷基硫酸脂)(0.5％和1％)兩個(gè)較好的濃度和平衡時(shí)間(Oh和2h

3、)相互配伍來進(jìn)行豬精液冷凍，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在稀釋液中添加15％的卵黃、1％的甘油和0.5％的OEP，平衡2h組可獲得較好的活力(35％)和項(xiàng)體完整率(56.38％)；添加0-0.64mg/mL谷胱甘肽對精子的活力或頂體沒有顯著的改善。 2.選取6個(gè)不同的冷凍高度分別冷凍豬5mL大管精液，檢測凍后精子的活力、質(zhì)膜完整性和頂體完整性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1cm組凍后活力和頂體完整率最高，分別為55.00％和80.08％；解凍溫度分42℃(30s、

4、40s、50s)、52℃(18s、25s、35s、45s)和60℃(20s、30s、40s)共10個(gè)組別，試驗(yàn)結(jié)果表明，解凍溫度和對應(yīng)的解凍時(shí)間對凍后精子的活力影響不明顯，頂體完整性卻差異顯著，以42℃40s組最佳，為59.50％，并在解凍15分鐘后精子活力最高，都在0.4以上。 3.本試驗(yàn)比較了顆粒、0.25mL細(xì)管和5mL大管三種劑型冷凍豬精液的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5mL大管凍后活力(40％)、活率(49.58％)、質(zhì)膜完整率(

5、53.91％)和頂體完整率(52.65％)比0.25mL細(xì)管低，但差異不顯著；采用SmL大管凍后精液和新鮮精液進(jìn)行IVF試驗(yàn)，無論是在卵裂率，還是桑椹胚或囊胚率上均不存在顯著差異(P>0.05)；本試驗(yàn)還利用顆粒和SmL大管凍后精液進(jìn)行輸精，發(fā)現(xiàn)受胎率相當(dāng)。豬精液5mL大管冷凍保存方法的建立及優(yōu)化 4.利用掃描電鏡技術(shù)，研究5mL大管精液超低溫冷凍前后豬精子的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，凍后精子的頂體膜和質(zhì)膜腫脹，大都呈泡狀化，部