去細(xì)胞心臟支架的制備和鑒定.pdf

1、心血管疾病已成為全球死亡率最高的疾病之一，心力衰竭是各種心血管疾病的終末期。傳統(tǒng)治療方法主要有藥物治療、外科治療和介人治療等，都不能達(dá)到根治的程度，只能在一定程度上緩解心力衰竭的發(fā)生或癥狀，唯一能夠根治心力衰竭的方法是進(jìn)行心臟移植。但是心臟移植術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)及其并發(fā)癥是導(dǎo)致術(shù)后患者死亡的主要原因。此外用于手術(shù)的供體短缺是長(zhǎng)久以來(lái)限制心臟移植的進(jìn)行和發(fā)展的另一重要因素。當(dāng)今，組織工程學(xué)進(jìn)行了一系列的研究，以獲得用于心臟移植手術(shù)的人工生

2、物替代品。研究探討了多種聚合物以及天然生物材料，其中去細(xì)胞化材料具有低免疫原性，良好的組織相容性，促進(jìn)細(xì)胞黏附、增殖等優(yōu)點(diǎn)，是目前最具有研究前景的生物材料。在組織工程技術(shù)和再生醫(yī)學(xué)研究中,去細(xì)胞生物支架材料如心臟瓣膜、血管、皮膚、神經(jīng)、骨骼肌、腱膜、韌帶、小腸粘膜下組織、膀胱和肝臟,已經(jīng)進(jìn)入臨床前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或臨床治療階段。
　　 目的：本文旨在利用去污劑在Langendorff 灌流裝置上進(jìn)行主動(dòng)脈逆行性灌流以制備去細(xì)胞心臟支架

3、，并對(duì)該生物支架進(jìn)行初步鑒定，為下一步結(jié)合種子細(xì)胞進(jìn)行人工心臟構(gòu)建提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　 方法：1．成年雄性SD 大鼠，通過(guò)腹腔注射進(jìn)行全身肝素化。10％水合氯醛麻醉后正中胸骨切開術(shù)打開胸腔，除去胸骨后脂肪體，解剖分離升主動(dòng)脈及分支血管。結(jié)扎其分支血管，從胸腔取出心臟置于冰的肝素PBS中。預(yù)先準(zhǔn)備的主動(dòng)脈插管插入升主動(dòng)脈進(jìn)行逆行性冠脈灌注。首先用含有10uM 腺苷的肝素PBS在77.4mmHg 動(dòng)脈灌注壓下灌注15分鐘，然后使用1

4、％十二烷基硫酸鈉灌流12-20 小時(shí)至心臟成乳白色囊狀物，接著用去離子水灌注15分鐘，用1％Triton-X100 灌注30分鐘，最后用含有抗生素PBS 灌注2 小時(shí)。2．對(duì)去細(xì)胞心臟支架進(jìn)行固定，按照常規(guī)處理后進(jìn)行H&E組織學(xué)染色，免疫熒光染色等初步鑒定。
　　 結(jié)果：1．H&E組織學(xué)染色結(jié)果顯示：去細(xì)胞心臟支架中沒有完整的細(xì)胞核，膠原纖維得到較好的保留。2．免疫熒光染色結(jié)果顯示：去細(xì)胞心臟支架中保留了大部分膠原纖維，心肌細(xì)胞