黃連素的提純及其對三種水產動物類致病菌的抑菌特性研究.pdf

1、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）以及嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）為水產養(yǎng)殖業(yè)常見的病原菌，近年來由其引發(fā)的細菌性疾病不僅給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經濟損失，還威脅著人類的健康。本實驗以黃連為材料，研究黃連素的最佳提純工藝以及其對三種病原菌的抑菌作用，同時探討黃連素的抑菌機制，為黃連素在細菌性疾病防治中的應用提供依據，也利于進一步深究黃

2、連素的抑菌機理。
　　利用傳統回流、微波、超聲等6種方法提取黃連素，并用沉淀法與大孔樹脂法純化，TLC、HPLC測定，結果表明80％乙醇，料液比1：20，T=90℃，t=90min回流提取2次黃連素得率為8.3%，經大孔樹脂-沉淀法純化、HPLC測定，黃連素純度為86.25%。
　　測定黃連素對三種供試菌MIC、MBC，并運用電鏡掃描黃連素對供試菌的作用情況，結果發(fā)現，黃連素對三種副溶血弧菌、溶藻弧菌有著強烈的抑制效果，其M

3、IC(Minimal inhibitory Concentration)、MBC(Minimal Bactericidal Concentration)值分別為：0.391g/L、0.391g/L；0.391g/L、0.781g/L；對嗜水氣單胞菌的抑制作用相對較弱，MIC、MBC分別為：0.781g/L、1.563g/L。電鏡觀察發(fā)現，黃連素作用下的供試菌菌體黏連、破碎、內容物流出等，明顯非正常死亡，且黃連素對菌體的破壞程度隨著黃連素

4、濃度增加而增加。
　　抑菌圈法測定黃連素對革蘭氏陽性菌與陰性菌的作用差異，氧電極法測定不同濃度黃連素對三種供試菌的呼吸作用影響，并據吸光值繪制黃連素作用下供試菌一步生長曲線，SDS-PAGE觀察黃連素對供試菌蛋白表達的影響，以黃連素代替EB核酸進行核酸電泳。結果表明，黃連素作用下：
　　①革蘭氏陽性菌與陰性菌的抑菌圈無明顯差異；
　?、谌N供試菌單位時間內耗氧量微有降低但無明顯規(guī)律；
　?、酃┰嚲鷿摲谘娱L2h至

5、4h不等，但延長后部分菌體仍存在對數期；
　?、艿鞍诐舛冉档?，且電泳顯示部分條帶未表達；
　?、蔹S連素可以像EB一樣插入到DNA中。
　　綜上，本文對黃連素的提取及其對水產動物類致病菌的作用進行了較為系統的研究，不僅獲得了黃連素的最佳提取工藝，還發(fā)現其對副溶血弧菌、溶藻弧菌以及氣單胞菌有著良好的抑菌效果，可以應用于水產養(yǎng)殖業(yè)細菌性疾病的防治中，抑菌機制方面，黃連素在細菌潛伏期與活躍的DNA發(fā)生結合形成了某種復合物，從而