高眼壓大鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量變化及辛伐他汀干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　　1.建立大鼠高眼壓模型，研究高眼壓大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡隨病程發(fā)展的變化情況。
　　2.研究高眼壓大鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)數(shù)量隨病程發(fā)展變化。
　　3.探討高眼壓大鼠辛伐他汀干預(yù)對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡及外周血EPCs的影響，探討其對(duì)視網(wǎng)膜改善作用，為高眼壓視神經(jīng)保護(hù)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.3月齡雄性Wistar大鼠，體重220～25

2、0g，共150只，隨機(jī)分為①正常對(duì)照組20只，②高眼壓組100只，③激光組30只。高眼壓組大鼠采用光凝角鞏膜緣靜脈及鞏膜上靜脈方法建立大鼠高眼壓模型，根據(jù)其病程不同將其分為5個(gè)亞組，即高眼壓3天、7天、3周、2月、3月組。激光組大鼠采用光凝靜脈外側(cè)，避免光凝血管壁建立大鼠激光組模型。根據(jù)激光干預(yù)后時(shí)間長(zhǎng)短分為3個(gè)亞組，即激光3天、7天、3周組。測(cè)定5個(gè)亞組及激光組3個(gè)亞組大鼠外周血EPCs數(shù)量。HE染色觀察高眼壓組大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)，末

3、端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞，免疫組織化學(xué)法測(cè)定視網(wǎng)膜Bc1-2/Bax水平。
　　2.高眼壓組大鼠100只，隨機(jī)選取30只，予辛伐他汀以20mg/kg每日灌胃給藥，連續(xù)灌21日作為干預(yù)組，予20只生理鹽水灌胃作為空白對(duì)照組，余50只高眼壓大鼠不服用任何藥物，作為高眼壓陽(yáng)性對(duì)照組。干預(yù)組根據(jù)其病程長(zhǎng)短分別分為3個(gè)亞組，即干預(yù)組3天、7天、3周組。測(cè)定3個(gè)亞組外周血EPCs數(shù)量。H

4、E染色觀察干預(yù)組3周組大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)，以TUNEL法檢測(cè)視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞，免疫組織化學(xué)法測(cè)定視網(wǎng)膜Bc1-2/Bax水平。
　　結(jié)果：
　　1.眼壓3天時(shí)達(dá)到高峰，后逐漸緩慢下降，但仍高于正常8mmHg以上，維持3月以上。激光組3天也達(dá)高峰，后緩慢下降。外周血EPCs數(shù)量3天達(dá)高峰，后緩慢降低，高眼壓組比激光組下降更明顯(p<0.05)。
　　2.高眼壓大鼠視網(wǎng)膜HE染色和正常對(duì)照組相比，高眼壓3天、7天、3周各亞組

5、大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)未見(jiàn)明顯差異；高眼壓2月時(shí)，視網(wǎng)膜各層明顯變薄以外核層最為顯著，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量顯著減少；高眼壓3個(gè)月時(shí)可見(jiàn)視網(wǎng)膜變薄進(jìn)一步加重，外核層更薄，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量更少，排列更加紊亂。
　　3.免疫組化高眼壓大鼠Bc1-2/Bax陽(yáng)性細(xì)胞比例和正常對(duì)照組相比，Bc1-2陽(yáng)性細(xì)胞高眼壓3天、7天、3周亞組未見(jiàn)明顯差異(p>0.05)，高眼壓2月、3月亞組陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯增高(p<0.05)；Bax陽(yáng)性細(xì)胞高眼壓3天、7天亞組未見(jiàn)

6、明顯差異(p>0.05)，高眼壓3周、2月、3月亞組陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯增高(p<0.05)。高眼壓大鼠TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞比例隨病程逐漸增高。
　　4.干預(yù)組大鼠與高眼壓組相比，眼壓未見(jiàn)明顯差異(p>0.05)。外周血EPCs數(shù)量3天達(dá)高峰，后緩慢降低，3天時(shí)高于高眼壓組(p<0.05)，3周時(shí)也高于高眼壓組(p<0.05)。HE染色視網(wǎng)膜各層形態(tài)稍整齊；Bc1-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)未見(jiàn)明顯差異(p>0.05)。Bax陽(yáng)性細(xì)胞比例降低，TUN

7、EL陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯降低。
　　結(jié)論：
　　1.通過(guò)光凝角鞏膜緣靜脈及鞏膜上靜脈方法可成功建立大鼠高眼壓模型，高眼壓早期外周血EPCs數(shù)量達(dá)高峰，后緩慢降低。外周血EPCs數(shù)量高眼壓與激光組早期相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.隨高眼壓病程延長(zhǎng)視網(wǎng)膜感光細(xì)胞凋亡數(shù)量逐漸增多，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞明顯減少。
　　3.辛伐他汀干預(yù)可以提高高眼壓早期外周血EPCs數(shù)量，使凋亡細(xì)胞數(shù)量減少，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞剩余數(shù)量增多，可能對(duì)模型大鼠視網(wǎng)膜各